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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR结果突然和以前不同
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2207993

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR结果突然和以前不同

PCR电泳图，条带不集中，弥散很严重，是什么原因呢
电泳缓冲液TAE，新配的
以前的条件、体系都没变，跑不出原来的效果了
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1楼 2011-01-04 10:54:17
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
★
2207993(金币+1): 2011-01-04 11:12:51
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-04 22:28:29
最好附张照片看看。
可以考虑是不是模板放置的时间过长，或者你是否前后用的模板不一致？
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2楼2011-01-04 11:02:21
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-04 12:23:36
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:45
加样孔中怎么滞留了那么多的样品？确定电泳没有问题？
多做两次PCR,若结果还是这样，则考虑是不是模板放置的时间过长（降解了等等问题）？
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3楼2011-01-04 11:06:33
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2207993

金虫 (小有名气)
做了四五次了，DNA样品重新提取制备了，结果还是这样
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4楼2011-01-04 11:13:48
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不是马甲3

木虫 (初入文坛)
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:52
MARKER都没跑好，是不是胶的问题啊？
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5楼2011-01-04 11:19:58
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紫柳潇潇

金虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:58
你的胶是不是有问题啊
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6楼2011-01-04 11:39:44
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doukezhiwu

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-04 12:23:54
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:14:34
提取的DNA不纯，点样孔里的白色残留可能是蛋白酶没有溶解的蛋白；再就是配制的电泳液或缓冲液可能不是用ddH2O配制的，是否用蒸馏水配制的；还有PCR仪也许不稳定或者和上次用的不是一个机子。
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7楼2011-01-04 11:44:49
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 2207993 at 2011-01-04 11:13:48:
做了四五次了，DNA样品重新提取制备了，结果还是这样

有可能是污染了。 把所有东西都灭菌试试。 另， 详细检查TAE
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8楼2011-01-04 12:43:25
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:02:21:
最好附张照片看看。
可以考虑是不是模板放置的时间过长，或者你是否前后用的模板不一致？

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！
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9楼2011-01-04 13:50:07
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:06:33:
加样孔中怎么滞留了那么多的样品？确定电泳没有问题？
多做两次PCR,若结果还是这样，则考虑是不是模板放置的时间过长（降解了等等问题）？

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！
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10楼2011-01-04 13:50:38
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天使托

专家顾问 (职业作家)
重新配胶，体系稍微变一下，看看效果如何？
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11楼2011-01-04 14:58:04
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2011-01-04 13:50:38:

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！

提的DNA模板在-20可以放很久的
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12楼2011-01-04 15:59:56
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
一般情况下，DNA模板放置四度或者常温数月问题都不大，要是更低温度保存可放置更长时间的。不过有可能你在做pcr过程，造成了模板的损伤或者污染。
我们实验室前段时间也遇到了和你一样的情况，我们后来就发现主要是DNA模板出问题了。后来重新更换了DNA模板，就出来了很漂亮的条带。
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13楼2011-01-04 19:54:47
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
一般情况下，DNA模板放置四度或者常温数月问题都不大，要是更低温度保存可放置更长时间的。不过有可能你在做pcr过程，造成了模板的损伤或者污染。
我们实验室前段时间也遇到了和你一样的情况，我们后来就发现主要是DNA模板出问题了。后来重新更换了DNA模板，就出来了很漂亮的条带。
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14楼2011-01-04 19:55:53
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513279618

银虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:24
合成新引物看看，应该可以p出结果。还有就是你得胶配的不是很好，按理说应该有一段很亮的弥散带，降低一下循环数。
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16楼2011-01-05 15:47:34
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:17
1.胶没配好，Marker跑得不好
2.酶的效率不如从前，建议换酶
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17楼2011-01-17 21:39:00
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ycyqh

新虫 (初入文坛)

估计是电泳胶的问题

2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:11
有可能是胶太薄了，以前出现过类似问题。要么是胶凝固不均匀也有类似现象出现。
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18楼2011-01-17 22:44:36
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QIAO4984

铜虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:02
不是   

一看那条歪歪的带   我就知道是怎么回事


是缓冲液的问题   配的缓冲液浓度不对   或者  缓冲液和胶的浓度不对



总之是缓冲液没配好
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19楼2011-01-17 23:30:45
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QIAO4984

铜虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:19:56
去别的实验室换个槽子 换个TAE试试  


如果还不行   说明是PCR的问题
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20楼2011-01-17 23:31:43
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简单回复
tianhuijuan15楼
2011-01-05 12:27   回复  
引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-01-04 15:59:56: 提的DNA模板在-20可以放很久的

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