应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR结果突然和以前不同
201/1返回列表
查看: 2032  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2207993

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR结果突然和以前不同

PCR电泳图，条带不集中，弥散很严重，是什么原因呢
电泳缓冲液TAE，新配的
以前的条件、体系都没变，跑不出原来的效果了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-04 10:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpfxmc

木虫 (初入文坛)
★
2207993(金币+1): 2011-01-04 11:12:51
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-04 22:28:29
最好附张照片看看。
可以考虑是不是模板放置的时间过长，或者你是否前后用的模板不一致？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-04 11:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpfxmc

木虫 (初入文坛)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-04 12:23:36
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:45
加样孔中怎么滞留了那么多的样品？确定电泳没有问题？
多做两次PCR,若结果还是这样，则考虑是不是模板放置的时间过长（降解了等等问题）？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-04 11:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2207993

金虫 (小有名气)
做了四五次了，DNA样品重新提取制备了，结果还是这样
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-04 11:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不是马甲3

木虫 (初入文坛)
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:52
MARKER都没跑好，是不是胶的问题啊？
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-04 11:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫柳潇潇

金虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:13:58
你的胶是不是有问题啊
赞一下 回复此楼
6楼2011-01-04 11:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doukezhiwu

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-04 12:23:54
2207993(金币+1): 2011-01-04 19:14:34
提取的DNA不纯，点样孔里的白色残留可能是蛋白酶没有溶解的蛋白；再就是配制的电泳液或缓冲液可能不是用ddH2O配制的，是否用蒸馏水配制的；还有PCR仪也许不稳定或者和上次用的不是一个机子。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-04 11:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 2207993 at 2011-01-04 11:13:48:
做了四五次了，DNA样品重新提取制备了，结果还是这样

有可能是污染了。 把所有东西都灭菌试试。 另， 详细检查TAE
赞一下 回复此楼
8楼2011-01-04 12:43:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:02:21:
最好附张照片看看。
可以考虑是不是模板放置的时间过长，或者你是否前后用的模板不一致？

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！
赞一下 回复此楼
9楼2011-01-04 13:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:06:33:
加样孔中怎么滞留了那么多的样品？确定电泳没有问题？
多做两次PCR,若结果还是这样，则考虑是不是模板放置的时间过长（降解了等等问题）？

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！
赞一下 回复此楼
10楼2011-01-04 13:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
重新配胶，体系稍微变一下，看看效果如何？
赞一下 回复此楼
11楼2011-01-04 14:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2011-01-04 13:50:38:

请问一下，模板一般最多可以放置多长时间？
多谢！

提的DNA模板在-20可以放很久的
赞一下 回复此楼
12楼2011-01-04 15:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpfxmc

木虫 (初入文坛)
一般情况下，DNA模板放置四度或者常温数月问题都不大，要是更低温度保存可放置更长时间的。不过有可能你在做pcr过程，造成了模板的损伤或者污染。
我们实验室前段时间也遇到了和你一样的情况，我们后来就发现主要是DNA模板出问题了。后来重新更换了DNA模板，就出来了很漂亮的条带。
赞一下 回复此楼
13楼2011-01-04 19:54:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpfxmc

木虫 (初入文坛)
一般情况下，DNA模板放置四度或者常温数月问题都不大，要是更低温度保存可放置更长时间的。不过有可能你在做pcr过程，造成了模板的损伤或者污染。
我们实验室前段时间也遇到了和你一样的情况，我们后来就发现主要是DNA模板出问题了。后来重新更换了DNA模板，就出来了很漂亮的条带。
赞一下 回复此楼
14楼2011-01-04 19:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

513279618

银虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:24
合成新引物看看，应该可以p出结果。还有就是你得胶配的不是很好，按理说应该有一段很亮的弥散带，降低一下循环数。
赞一下 回复此楼
16楼2011-01-05 15:47:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:17
1.胶没配好，Marker跑得不好
2.酶的效率不如从前，建议换酶
赞一下 回复此楼
17楼2011-01-17 21:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ycyqh

新虫 (初入文坛)

估计是电泳胶的问题

2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:11
有可能是胶太薄了，以前出现过类似问题。要么是胶凝固不均匀也有类似现象出现。
赞一下 回复此楼
18楼2011-01-17 22:44:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

QIAO4984

铜虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:20:02
不是   

一看那条歪歪的带   我就知道是怎么回事


是缓冲液的问题   配的缓冲液浓度不对   或者  缓冲液和胶的浓度不对



总之是缓冲液没配好
赞一下 回复此楼
19楼2011-01-17 23:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

QIAO4984

铜虫 (小有名气)
2207993(金币+1): 2011-01-18 18:19:56
去别的实验室换个槽子 换个TAE试试  


如果还不行   说明是PCR的问题
赞一下 回复此楼
20楼2011-01-17 23:31:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tianhuijuan15楼
2011-01-05 12:27   回复  
引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-01-04 15:59:56: 提的DNA模板在-20可以放很久的

相关版块跳转 我要订阅楼主 2207993 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 3/150 2026-03-15 17:32 by 小物理化学
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭