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金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】想问一下全质粒缺失一个氨基酸的突变怎么设计引物啊？？有用的资源赏金�

如题啊!最近做一个质粒的一个氨基酸缺失突变，设计引物测序就是不成功啊，有没有高人帮助一下，十分感激啊。谢谢！！有用资源必给金币

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1楼 2010-12-31 17:28:26

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susizheng

木虫 (著名写手)

36894256(金币+15):不知道有效么先给你点看看 2011-01-04 10:23:16

质粒多大，如果能用PCR扩增全长的话，我建议用这种定点突变的试剂盒改变下策略应该可以。
试剂盒说明书如下。
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=10484959m27flmjlzmmpf7zu

该方法，以需要突变的质粒为模板，设计一对引物，扩增整个环状质粒，设计引物的时候引入突变，然后利用Dpn I消化模板，由于Dpn I只能内切甲基化的质粒模板，而不会消化扩增得到的质粒，将处理过的扩增产物转化感受态细胞，然后筛选突变成功的质粒，突变率为90%

设计引物的时候，突变位点更改为缺失掉三个碱基序列就是了。

[ Last edited by susizheng on 2011-1-1 at 13:15 ]

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