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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图 已有17人参与


这是我用其他物种唐鱼、鲤鱼的目的基因片段的引物去扩乌贼的这个目的片段，出现了很多条带（还有很多的相关引物正在做，先做的这两条），目的片段是b-actin，应该还算保守吧？
图：上面是唐鱼，下面是鲤鱼
从左至右是45-65度的退火温度梯度
本人觉得是引物特异性不高，因为前面45度时条带很多，到后面的65度又没有条带出现。
高手帮我出出主意，怎么能增加特异性扩增？

[ Last edited by feiye2214 on 2010-12-9 at 21:52 ]
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1楼 2010-12-09 21:27:31
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
杂带不是问题，关键是这些杂带中有没有和目的片段大小一致的条带？？？
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14楼2010-12-10 09:52:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
鱼类和乌贼亲缘关系太远了，所以楼主无法获得目的条带，我想这是主要原因，乌贼是软体动物，楼主甚至应该考虑用贝类的基因，都不应该考虑用鱼类的，我给点建议，查一下太平洋牡蛎、鲍等，是否有测序的beta-actin。你目前的引物还是放弃吧，扩出来的带，显然不可能是目的条带，筛选温度和touch-down都是浪费时间
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25楼2010-12-10 21:29:18
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