应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来
51/1返回列表
查看: 1924  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

panl234

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来 已有6人参与

从九月初开始一直在做基因克隆，目的片段981bp，载体用的是pcDNA3.0（原先师姐已经插入了一个981bp的片段），我把载体重新酶切，连上自己的片段，从cDNA得到的片段是981bp，就是到验证时片段就变成了750bp，特别亮，十分特异！但酶切还是有981bp的带，是哪布出了问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-13 13:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yuhuimeiye at 2010-11-13 14:42:36:
楼主，你把你的目的序列与载体序列进行一下比对，看其是否有相似序列，如果没有，请核实一下你的引物，如果引物能扩增的片段也是981bp，就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后，建议楼主进行测序， ...

恩，很有用的建议，谢谢！
我真想直接就去测，可老板一看PCR结果就说测了也不对
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-13 16:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，你把你的目的序列与载体序列进行一下比对，看其是否有相似序列，如果没有，请核实一下你的引物，如果引物能扩增的片段也是981bp，就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后，建议楼主进行测序，无论是扩增还是酶切验证，都是粗略的，最真实的还是测序，建议直接测序。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-13 14:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leo_stu

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
拿载体做实验前还是先测序下。
赞一下(1人) 回复此楼
-------------------------Science，Cell，Nature---------------
3楼2010-11-13 16:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)
多谢！
我也很想直接去测序，都做了两遍了！可是老板一看PCR结果就说：不能测！谢谢你的建议
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-13 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程调剂289 +41 yang婷 2026-04-07 47/2350 2026-04-09 23:23 by wolf97
[考研] 材料复试求调剂 +16 xhhdjdjsjks 2026-04-09 16/800 2026-04-09 20:56 by bljnqdcc
[考研] 288求调剂 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-09 17:59 by qluyyj
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-06 14/700 2026-04-08 23:00 by 猪会飞
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 274求调剂求调剂 +10 Jachenbingoo 2026-04-06 13/650 2026-04-08 14:25 by zhq0425
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-04 20:37 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭