应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来
51/1返回列表
查看: 1920  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

panl234

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来 已有6人参与

从九月初开始一直在做基因克隆，目的片段981bp，载体用的是pcDNA3.0（原先师姐已经插入了一个981bp的片段），我把载体重新酶切，连上自己的片段，从cDNA得到的片段是981bp，就是到验证时片段就变成了750bp，特别亮，十分特异！但酶切还是有981bp的带，是哪布出了问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-13 13:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yuhuimeiye at 2010-11-13 14:42:36:
楼主，你把你的目的序列与载体序列进行一下比对，看其是否有相似序列，如果没有，请核实一下你的引物，如果引物能扩增的片段也是981bp，就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后，建议楼主进行测序， ...

恩，很有用的建议，谢谢！
我真想直接就去测，可老板一看PCR结果就说测了也不对
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-13 16:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，你把你的目的序列与载体序列进行一下比对，看其是否有相似序列，如果没有，请核实一下你的引物，如果引物能扩增的片段也是981bp，就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后，建议楼主进行测序，无论是扩增还是酶切验证，都是粗略的，最真实的还是测序，建议直接测序。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-13 14:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leo_stu

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
拿载体做实验前还是先测序下。
赞一下(1人) 回复此楼
-------------------------Science，Cell，Nature---------------
3楼2010-11-13 16:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)
多谢！
我也很想直接去测序，都做了两遍了！可是老板一看PCR结果就说：不能测！谢谢你的建议
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-13 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601初试330分找调剂 +8 流心奶黄包l 2026-04-09 8/400 2026-04-09 19:19 by 5268321
[考研] 266求调剂 +21 阳阳哇塞 2026-04-07 21/1050 2026-04-09 19:17 by laoshidan
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +19 慕绝cc 2026-04-09 23/1150 2026-04-09 17:14 by 段伟艳
[考研] 考研调剂 +13 冰冰，，， 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-09 3/150 2026-04-09 16:20 by zhuimr
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 机械调剂 +3 zzzbcb 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:19 by hemengdong
[考研] 22408 一志愿双一流人工智能300分 四六级，数据分析国奖 +4 zzfeng123 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:02 by zzfeng123
[考研] 一志愿南科大生物学297分，求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 080500求调剂 +12 黄宇博 2026-04-06 12/600 2026-04-07 12:41 by upczlm1989
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 315求调剂 +5 ＆123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:24 by 544594351
[考研] 341求调剂 +3 洛多罗 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:36 by 智能智慧
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭