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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】胶回收产物PCR
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】胶回收产物PCR

PCR后出现三条带，我将其中一条回收，然后用纯化后的胶回收产物做PCR，但是扩增出来不是目的条带，不明白这是为什么，望大家帮忙解答。
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1楼 2010-10-16 04:08:30
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。不多第一次听说，很有创意。 2010-10-16 05:04:31
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:25
你可以直接在目标条带的地方用枪头取一点胶直接拿来做PCR模板，很有效！我们都这么做第二次PCR的
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2楼2010-10-16 04:19:52
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-10-16 09:01:59
gdongli8325(金币+2): 2010-10-17 19:07:36
以我的经验，以PCR产物作为模板扩展片段，一般是扩增不出来的！如果能扩展出来，很有可能应该错配！如仍想以PCR产物做模板，可先将其连接到T载体上，然后扩展，能够受到很好的效果！
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Nothingisimpossible!
3楼2010-10-16 06:57:19
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 09:02:11
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:41
回收的带并不是你的目的带，有可能是单引物扩增。
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4楼2010-10-16 08:11:51
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。很活跃。 2010-10-16 09:02:22
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:46
你先把回收的片段跑个胶，要是有你要的目的带，那就可以排除胶回收的问题。
然后你把回收的胶做模板，跑PCR，没有目的带，可能就是假阳性，也就是单引物扩增，
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5楼2010-10-16 08:49:16
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没有眼泪

铜虫 (初入文坛)
如果还有剩下的胶回收产物，建议连到T载体上测序看看
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6楼2010-10-17 14:04:16
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