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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】胶回收产物PCR

PCR后出现三条带,我将其中一条回收,然后用纯化后的胶回收产物做PCR,但是扩增出来不是目的条带,不明白这是为什么,望大家帮忙解答。
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xiangquanju

金虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1):谢谢分享。不多第一次听说,很有创意。 2010-10-16 05:04:31
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:25
你可以直接在目标条带的地方用枪头取一点胶直接拿来做PCR模板,很有效!我们都这么做第二次PCR的
2楼2010-10-16 04:19:52
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)


dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-10-16 09:01:59
gdongli8325(金币+2): 2010-10-17 19:07:36
以我的经验,以PCR产物作为模板扩展片段,一般是扩增不出来的!如果能扩展出来,很有可能应该错配!如仍想以PCR产物做模板,可先将其连接到T载体上,然后扩展,能够受到很好的效果!
Nothingisimpossible!
3楼2010-10-16 06:57:19
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-16 09:02:11
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:41
回收的带并不是你的目的带,有可能是单引物扩增。
4楼2010-10-16 08:11:51
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taigongzaici

新虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):谢谢交流。很活跃。 2010-10-16 09:02:22
gdongli8325(金币+1): 2010-10-17 19:07:46
你先把回收的片段跑个胶,要是有你要的目的带,那就可以排除胶回收的问题。
然后你把回收的胶做模板,跑PCR,没有目的带,可能就是假阳性,也就是单引物扩增,
5楼2010-10-16 08:49:16
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没有眼泪

铜虫 (初入文坛)

如果还有剩下的胶回收产物,建议连到T载体上测序看看
6楼2010-10-17 14:04:16
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