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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

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[交流] 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急已有7人参与

我是用strep-tag，纯化蛋白后跑sds-page，总是有很多扎带，如何能高度纯化蛋白呢，就只得到目的条带

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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！

1楼 2010-08-11 13:39:26

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冼亮淀粉酶

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):淀粉酶，很热心~ 2010-08-11 18:03:37

有标签，亲和层析还有很多杂带就少见了。建议考虑下换标签，例如his-tag。

不建议像2楼说的用SDS-PAGE来做蛋白质回收，用SDS FREE的，不用做复性了，复性不是每个蛋白质都容易做得出来的。如果你的蛋白质表现出来的活性易于鉴别的的，可以考虑切胶洗脱。

3楼说的分子筛，如果是预装柱，上样量一般推荐为柱床体积的1%，这样要获得足够蛋白质就必须要极浓的蛋白质。而且过柱时流速推荐不大于1毫升每分钟，加上平衡和完事后洗柱保存，时间投入极大。不如先试一下离子交换，低盐上样高盐洗脱的，盐离子不高的话，很多蛋白质都没事，而且流速可高达5毫升每分钟。如果高盐也可耐受，还可以做疏水层析。

如果不行，就换标签his吧，省事。