| 查看: 2703 | 回复: 1 | |||
[交流]
【求助/交流】请教如何用乙醇沉淀法纯化回收DNA
|
|
最近做文库，插入片段（PCR产物）用量太大，远远超出普通纯化柱子的负载量，而且还需要最终纯化后浓度较高，所以多个柱子分开回收也不可行。于是想起了乙醇沉淀。 向各位请教protocol， 另外，乙醇沉淀之前怎样去除蛋白（比如PCR反应里的酶）？ 或者，如果有商业化的类似此功能的试剂盒，更好。 [ Last edited by gongeleven on 2011-1-27 at 09:20 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？
已经有19人回复
- 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】乙醇沉淀法纯化cDNA
已经有4人回复
- 【求助/交流】求助-苯酚氯仿纯化DNA方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】请问大家关于dna回收的问题
已经有14人回复
- 【求助】如何分离、回收乙醇和氯仿
已经有24人回复
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113377
- 帖子: 28967
- 在线: 3729.1小时
- 虫号: 464575
gongeleven(金币+5): 谢谢！我的文库大小需要达到10e9，而且转化效率不如Ecoli，所以需要的DNA多。 2011-01-28 09:24:10
|
作文库需要用这么多PCR产物么？？？？ 想出去蛋白的话，乙醇沉淀之前先将PCR产物加TE稀释至一个相对较大的体积，然后用酚氯仿抽提一次即可。取水相进行乙醇沉淀。 沉淀很固定的protocol就可以： 2.5体积的冰乙醇，0.1体积的 3M 醋酸钠； 可以低温放置一会儿，离心沉淀；弃上清，用70%乙醇洗盐；离心弃乙醇，风干重新溶于TE中即可。 我还是想问我最先问的那个问题。我建过基因组文库和16S文库，也没用用很多DNA或者PCR产物啊，50ul PCR的量就足够挑数千个克隆了。 |
2楼2011-01-27 16:23:50
