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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】请教如何用乙醇沉淀法纯化回收DNA

最近做文库,插入片段(PCR产物)用量太大,远远超出普通纯化柱子的负载量,而且还需要最终纯化后浓度较高,所以多个柱子分开回收也不可行。于是想起了乙醇沉淀。

向各位请教protocol,
另外,乙醇沉淀之前怎样去除蛋白(比如PCR反应里的酶)?


或者,如果有商业化的类似此功能的试剂盒,更好。

[ Last edited by gongeleven on 2011-1-27 at 09:20 ]
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gongeleven(金币+5): 谢谢!我的文库大小需要达到10e9,而且转化效率不如Ecoli,所以需要的DNA多。 2011-01-28 09:24:10
作文库需要用这么多PCR产物么????

想出去蛋白的话,乙醇沉淀之前先将PCR产物加TE稀释至一个相对较大的体积,然后用酚氯仿抽提一次即可。取水相进行乙醇沉淀。

沉淀很固定的protocol就可以: 2.5体积的冰乙醇,0.1体积的 3M 醋酸钠; 可以低温放置一会儿,离心沉淀;弃上清,用70%乙醇洗盐;离心弃乙醇,风干重新溶于TE中即可。

我还是想问我最先问的那个问题。我建过基因组文库和16S文库,也没用用很多DNA或者PCR产物啊,50ul PCR的量就足够挑数千个克隆了。
2楼2011-01-27 16:23:50
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