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511594234

金虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】这种情况下如何做荧光定量啊

求助，目前手上有一个基因的两个亚型，开放阅读框的序列相似性很高，设计引物做荧光定量，pcr产物测序后有非特异性扩增，无法区分开这两个亚型。想请教高手这种情况下如何做定量。

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1楼 2011-03-31 21:35:07

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65900931

银虫 (小有名气)

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★
511594234(金币+3):谢谢参与
511594234(金币+5): 谢谢，反转录的cDNA为模板。 2011-04-01 09:24:53
看天(EPI+1): 专业指数 2011-04-01 13:49:38

不知道你是要做DNA定量还是反转录。如果是做反转录，序列同源性有多高？可以找到序列不同的地方设计PCR引物吗？
如果不行，应该可以找到一段13bp左右的序列明显差异的区域吧。设计一条引物macth这段区域，做特异引物的逆转录，然后在之前设计一对引物做real-time PCR应该就行了。
DNA的话可以考虑做探针。

[ Last edited by 65900931 on 2011-4-1 at 00:41 ]