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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抽病毒DNA做荧光定量，阴性老是不成立，怎么办
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小七咯

新虫 (初入文坛)

[求助] 抽病毒DNA做荧光定量，阴性老是不成立，怎么办

我用试剂盒抽病毒DNA之后，要做荧光定量PCR，但是结果老是不理想。用水一个抽的阴性对照的CT值总是在30-35之间，不知道怎么避免这种污染（配体系时是没有污染的，可以确定是抽的过程当中存在污染）。
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1楼 2011-08-12 12:46:48
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小七咯(金币+1): 2011-08-13 09:49:05
adslye(金币+1): 这个还要再判断，没那么容易气溶胶污染吧。 2011-08-14 09:29:55
应该是形成气溶胶污染了吧
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2楼2011-08-12 14:38:01
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小七咯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gloryping at 2011-08-12 14:38:01:
应该是形成气溶胶污染了吧

那怎么解决？
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3楼2011-08-12 15:56:53
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:08:47
小七咯(金币+1): 2011-08-13 09:49:15
http://www.dxy.cn/bbs/thread/10629297#10629297
丁香园上一帖子 你看看吧 希望能帮到你
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4楼2011-08-12 16:12:52
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小七咯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gloryping at 2011-08-12 16:12:52:
http://www.dxy.cn/bbs/thread/10629297#10629297
丁香园上一帖子 你看看吧 希望能帮到你

这个是普通的PCR污染哦，不是抽病毒DNA过程中的污染，看完了，好像都在说怎么配样，换试剂，枪等~~~
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5楼2011-08-13 09:42:32
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love_st

金虫 (著名写手)
往往这样的问题最折磨人，哪个都有可能，原材料，环境，只能一个个排除吧
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6楼2011-08-13 21:14:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
adslye(金币+2): 西瓜说的就是我想说的，但万一不她是染料法。提问帖标准提问格式可以做下一个活动。 2011-08-14 09:37:38
除了污染，还有可能是引物二聚体。跑完之后可以看看融解曲线，如果是有污染，那么出现的峰应该和你样品的峰位置是一样的（产物一样）；如果是引物二聚体，那么会在温度较低的地方出现峰。也可以跑琼脂糖凝胶电泳，如果是引物二聚体，可以在100bp或者更低的地方看到弥散模糊的条带，而污染的话条带应该是很清晰的。
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7楼2011-08-14 00:39:29
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