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小七咯

新虫 (初入文坛)

[求助] 抽病毒DNA做荧光定量,阴性老是不成立,怎么办

我用试剂盒抽病毒DNA之后,要做荧光定量PCR,但是结果老是不理想。用水一个抽的阴性对照的CT值总是在30-35之间,不知道怎么避免这种污染(配体系时是没有污染的,可以确定是抽的过程当中存在污染)。
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小七咯(金币+1): 2011-08-13 09:49:05
adslye(金币+1): 这个还要再判断,没那么容易气溶胶污染吧。 2011-08-14 09:29:55
应该是形成气溶胶污染了吧
2楼2011-08-12 14:38:01
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小七咯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gloryping at 2011-08-12 14:38:01:
应该是形成气溶胶污染了吧

那怎么解决?
3楼2011-08-12 15:56:53
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:08:47
小七咯(金币+1): 2011-08-13 09:49:15
http://www.dxy.cn/bbs/thread/10629297#10629297
丁香园上一帖子 你看看吧 希望能帮到你
4楼2011-08-12 16:12:52
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小七咯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gloryping at 2011-08-12 16:12:52:
http://www.dxy.cn/bbs/thread/10629297#10629297
丁香园上一帖子 你看看吧 希望能帮到你

这个是普通的PCR污染哦,不是抽病毒DNA过程中的污染,看完了,好像都在说怎么配样,换试剂,枪等~~~
5楼2011-08-13 09:42:32
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love_st

金虫 (著名写手)


往往这样的问题最折磨人,哪个都有可能,原材料,环境,只能一个个排除吧
6楼2011-08-13 21:14:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
adslye(金币+2): 西瓜说的就是我想说的,但万一不她是染料法。提问帖标准提问格式可以做下一个活动。 2011-08-14 09:37:38
除了污染,还有可能是引物二聚体。跑完之后可以看看融解曲线,如果是有污染,那么出现的峰应该和你样品的峰位置是一样的(产物一样);如果是引物二聚体,那么会在温度较低的地方出现峰。也可以跑琼脂糖凝胶电泳,如果是引物二聚体,可以在100bp或者更低的地方看到弥散模糊的条带,而污染的话条带应该是很清晰的。
7楼2011-08-14 00:39:29
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