应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！
211/3返回列表123下一页
查看: 2008  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！ 已有12人参与

构建了3个融合基因片段，倒入PQE30载体，测序正确后，诱导表达只有1个蛋白表达了，条件都是一样的
转化，摇菌12H，菌液PCR验证正确，转接， 37℃2.5H ，1:50转接 37℃，1MMOL/L IPTG 1：1000 诱导3H，超声裂菌，SDS-PAGE结果其中的一个表达了，2个没有表达，求助，谢谢！
有位虫友告诉我 让我重新连接，转化，可是我测序是正确的啊！ 不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-28 09:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liyong1981

金虫 (正式写手)
原核表达有时候看运气~
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-06-28 09:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tigerpaw

木虫 (正式写手)
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有？
赞一下 回复此楼
聪明的人能洞察事物未来的发展趋势，他们在洪水来之前养鸭而不养鸡。
2楼2010-06-28 09:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2010-06-28 09:23:22:
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有？

做了菌液PCR，有目的条带
赞一下 回复此楼
3楼2010-06-28 09:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
看天(金币+1):鼓励回答 2010-06-28 09:33:52
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了，表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性，不表达也正常
恩，还有载体的突变问题……
太多了，具体问题要具体分析……
赞一下(1人) 回复此楼
For my life！
4楼2010-06-28 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-06-28 09:32:50:
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了，表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性，不表达也正常
恩，还有载体的突变问题……
太多了，具体问题要具体分析……

请问，我现在应该怎么办啊？
赞一下 回复此楼
6楼2010-06-28 09:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
有人有这方面的经验吗？
赞一下 回复此楼
7楼2010-06-28 10:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
都说了看运气的~
赞一下 回复此楼
8楼2010-06-28 10:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 10:42:10
jiangkuo0520(金币+1):据师姐经验此蛋白应该以包涵体表达 2010-06-28 12:00:01
看你表达的蛋白是何种类型蛋白，一般情况下水溶蛋白好表达，如谷胱甘肽S转移酶，若是真核生物膜蛋白、或是蛋白中有信号台等则不宜表达，还有有时表达的量太低，sds-page检测不到，只能werstern杂交才能检测。所以先要好好分析一下基因的种类特点。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-06-28 10:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
楼上正解·
回复此楼
10楼2010-06-28 10:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +5 knight344 2026-03-16 6/300 2026-03-18 15:17 by knight344
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 326求调剂 +4 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 7/350 2026-03-16 17:11 by 诺贝尔化学奖觊�
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭