24小时热门版块排行榜    

查看: 1882  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助! 已有12人参与

构建了3个融合基因片段,倒入PQE30载体,测序正确后,诱导表达只有1个蛋白表达了,条件都是一样的
转化,摇菌12H,菌液PCR验证正确,转接, 37℃2.5H ,1:50转接 37℃,1MMOL/L IPTG 1:1000 诱导3H,超声裂菌,SDS-PAGE结果其中的一个表达了,2个没有表达,求助,谢谢!
有位虫友告诉我 让我重新连接,转化,可是我测序是正确的啊! 不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2010-06-28 09:23:22:
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有?

做了菌液PCR,有目的条带
3楼2010-06-28 09:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-06-28 09:32:50:
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了,表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性,不表达也正常
恩,还有载体的突变问题……
太多了,具体问题要具体分析……

请问,我现在应该怎么办啊?
6楼2010-06-28 09:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

有人有这方面的经验吗?
7楼2010-06-28 10:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2010-06-28 15:54:49:
试试融合表达

我这就是融合表达啊
17楼2010-06-29 21:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

还有人知道怎么办吗?
18楼2010-06-30 15:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见