24小时热门版块排行榜    

查看: 1997  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助! 已有12人参与

构建了3个融合基因片段,倒入PQE30载体,测序正确后,诱导表达只有1个蛋白表达了,条件都是一样的
转化,摇菌12H,菌液PCR验证正确,转接, 37℃2.5H ,1:50转接 37℃,1MMOL/L IPTG 1:1000 诱导3H,超声裂菌,SDS-PAGE结果其中的一个表达了,2个没有表达,求助,谢谢!
有位虫友告诉我 让我重新连接,转化,可是我测序是正确的啊! 不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2010-06-28 09:23:22:
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有?

做了菌液PCR,有目的条带
3楼2010-06-28 09:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

tigerpaw

木虫 (正式写手)

有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有?
聪明的人能洞察事物未来的发展趋势,他们在洪水来之前养鸭而不养鸡。
2楼2010-06-28 09:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客


看天(金币+1):鼓励回答 2010-06-28 09:33:52
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了,表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性,不表达也正常
恩,还有载体的突变问题……
太多了,具体问题要具体分析……
For my life!
4楼2010-06-28 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


原核表达有时候看运气~
5楼2010-06-28 09:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 化学工程321分求调剂 +11 大米饭! 2026-03-15 14/700 2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 0703,333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
请填处理意见