应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！
211/3返回列表123下一页
查看: 2368  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！ 已有12人参与

构建了3个融合基因片段，倒入PQE30载体，测序正确后，诱导表达只有1个蛋白表达了，条件都是一样的
转化，摇菌12H，菌液PCR验证正确，转接， 37℃2.5H ，1:50转接 37℃，1MMOL/L IPTG 1：1000 诱导3H，超声裂菌，SDS-PAGE结果其中的一个表达了，2个没有表达，求助，谢谢！
有位虫友告诉我 让我重新连接，转化，可是我测序是正确的啊！ 不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-28 09:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liyong1981

金虫 (正式写手)
原核表达有时候看运气~
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-06-28 09:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tigerpaw

木虫 (正式写手)
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有？
赞一下 回复此楼
聪明的人能洞察事物未来的发展趋势，他们在洪水来之前养鸭而不养鸡。
2楼2010-06-28 09:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2010-06-28 09:23:22:
有没有跑琼脂糖凝胶验证一下转进去了没有？

做了菌液PCR，有目的条带
赞一下 回复此楼
3楼2010-06-28 09:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
看天(金币+1):鼓励回答 2010-06-28 09:33:52
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了，表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性，不表达也正常
恩，还有载体的突变问题……
太多了，具体问题要具体分析……
赞一下(1人) 回复此楼
For my life！
4楼2010-06-28 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-06-28 09:32:50:
pcr假阳性太多了
不过不表达也是常事
还有表达了，表达量不大也是常事
或者是蛋白对菌活性有毒性，不表达也正常
恩，还有载体的突变问题……
太多了，具体问题要具体分析……

请问，我现在应该怎么办啊？
赞一下 回复此楼
6楼2010-06-28 09:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
有人有这方面的经验吗？
赞一下 回复此楼
7楼2010-06-28 10:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
都说了看运气的~
赞一下 回复此楼
8楼2010-06-28 10:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 10:42:10
jiangkuo0520(金币+1):据师姐经验此蛋白应该以包涵体表达 2010-06-28 12:00:01
看你表达的蛋白是何种类型蛋白，一般情况下水溶蛋白好表达，如谷胱甘肽S转移酶，若是真核生物膜蛋白、或是蛋白中有信号台等则不宜表达，还有有时表达的量太低，sds-page检测不到，只能werstern杂交才能检测。所以先要好好分析一下基因的种类特点。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-06-28 10:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
楼上正解·
回复此楼
10楼2010-06-28 10:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭