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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！
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月月大可

木虫 (著名写手)
jiangkuo0520(金币+1):为什么包涵体不需要超声破碎呢？ 2010-06-29 21:39:12
真核膜蛋白有难度。如果表达的量低SDS-PAGE检测不到可以大量培养一些，利用亲和柱富集一下再跑电泳看看。如果经验判断是包涵体的话鉴定表达与否的时候可以直接跑全菌，而无需超声破碎！
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11楼2010-06-28 12:47:52
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
重复 做 3~5次很正常！
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12楼2010-06-28 14:51:40
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cheo163

金虫 (小有名气)
jiangkuo0520(金币+1):正在做低温6H诱导表达 2010-06-29 21:38:47
试试低温诱导，或者就直接纯化包涵体蛋白好了~
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13楼2010-06-28 15:37:39
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xlshanxlshan

木虫 (著名写手)
共同学习
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14楼2010-06-28 15:41:36
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
试试融合表达
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15楼2010-06-28 15:54:49
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
引用回帖:
Originally posted by jiangkuo0520 at 2010-06-28 09:38:27:

请问，我现在应该怎么办啊？

。。。。。。给具体实验细节，总有山人存在啊……没细节就不好说……
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For my life！
16楼2010-06-28 17:17:26
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2010-06-28 15:54:49:
试试融合表达

我这就是融合表达啊
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17楼2010-06-29 21:39:50
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
还有人知道怎么办吗？
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18楼2010-06-30 15:35:34
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guoenwen

金虫 (小有名气)
难道转进去了都要表达吗！原核表达系统虽然强大，但也不是万能的啊。很多时候不表达。建议做一个密码子优化。换个宿主菌，换个载体。都可以尝试。
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19楼2010-07-01 15:55:25
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xinyaolu

木虫 (小有名气)
jiangkuo0520(金币+1):xiexie 2010-07-17 16:51:54
在确定序列无误的情况下，可以37度诱导后先跑全细胞电泳，确认是否有蛋白。分析核酸序列中大肠杆菌稀有密码子情况，更换宿主。此外，如果这个蛋白是膜蛋白的话，可能就需要花点时间长期抗战了
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20楼2010-07-10 15:59:56
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