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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助! 已有12人参与

构建了3个融合基因片段,倒入PQE30载体,测序正确后,诱导表达只有1个蛋白表达了,条件都是一样的
转化,摇菌12H,菌液PCR验证正确,转接, 37℃2.5H ,1:50转接 37℃,1MMOL/L IPTG 1:1000 诱导3H,超声裂菌,SDS-PAGE结果其中的一个表达了,2个没有表达,求助,谢谢!
有位虫友告诉我 让我重新连接,转化,可是我测序是正确的啊! 不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]
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guoenwen

金虫 (小有名气)

难道转进去了都要表达吗!原核表达系统虽然强大,但也不是万能的啊。很多时候不表达。建议做一个密码子优化。换个宿主菌,换个载体。都可以尝试。
19楼2010-07-01 15:55:25
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