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dongfangzz

银虫 (小有名气)

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专业: 医学

[交流] 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理已有8人参与

三个问题：
1、要做Real-time PCR。总RNA提取后，RNA中DNaseⅠ的处理是常规的步骤还是可做可不做？
2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ时，有资料说 加入10μl 3M的醋酸钠，250μl 冷乙醇，冰上放置10分钟。该步的冷乙醇是无水乙醇还是70％的乙醇。后面的步骤用的是70％的乙醇（标明的）。而该处没标明浓度，很迷惑！
3、问题2中的 10μl 3M的醋酸钠 ，其中的3M 是什么意思？是浓度吗？但是浓度也不是这么表示的呀？

谢谢

[ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ]

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1楼 2010-06-04 12:17:21

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yangym1123

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):good 2010-06-04 21:35:13

一般是需要处理RNA中的基因组DNA的，即使电泳看不到DNA的污染，09年的一篇文章给出了荧光定量PCR发SCI论文的要求：MIQE，Google学术搜一下第一篇即是，处理基因组DNA是为了避免基因组污染的一个环节，还有跨内含子设计引物，试剂RTminus的对照；可是使用试剂盒提取RNA（在这个过程除去RNA中的DNA，如Qiagen和天跟的盒子）也可以用Fermentas的DNase I 在反转录之前处理基因组DNA，处理完用EDTA失活后接着往下做反转录就可以（我们实验室以前都是这么做的），关于MIQE的这篇文章建议做荧光定量发SCI的看看！祝你好运！