应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理
51/1返回列表
查看: 2483  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理 已有8人参与

三个问题：
1、要做Real-time PCR。总RNA提取后，RNA中DNaseⅠ的处理是常规的步骤还是可做可不做？
2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ时，有资料说 加入10μl 3M的醋酸钠，250μl 冷乙醇，冰上放置10分钟。该步的冷乙醇是无水乙醇还是70％的乙醇。后面的步骤用的是70％的乙醇（标明的）。而该处没标明浓度，很迷惑！
3、问题2中的 10μl 3M的醋酸钠 ，其中的3M 是什么意思？是浓度吗？但是浓度也不是这么表示的呀？
                                                            
                                                       谢谢

[ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-04 12:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的意见，一直是用M代表浓度的啊M是mol/L
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-04 16:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3):谢谢交流 2010-06-04 13:43:12
1.理论上说RNA中没有基因组DNA污染可不做，建议做。否则残留gDNA影响定量

2.无水乙醇

3. 浓度，3M=3mol/L。M是mol/L的简称
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-06-04 12:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-04 17:25:53
总RNA提取后，用RNA做模板，扩一下内参或表达水平高的基因，35个循环，如果无预期的带，则可不做DNaseⅠ处理。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-04 17:12:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):good 2010-06-04 21:35:13
一般是需要处理RNA中的基因组DNA的，即使电泳看不到DNA的污染，09年的一篇文章给出了荧光定量PCR发SCI论文的要求：MIQE，Google学术搜一下第一篇即是，处理基因组DNA是为了避免基因组污染的一个环节，还有跨内含子设计引物，试剂RTminus的对照；可是使用试剂盒提取RNA（在这个过程除去RNA中的DNA，如Qiagen和天跟的盒子）也可以用Fermentas的DNase I 在反转录之前处理基因组DNA，处理完用EDTA失活后接着往下做反转录就可以（我们实验室以前都是这么做的），关于MIQE的这篇文章建议做荧光定量发SCI的看看！祝你好运！
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-06-04 21:23:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭