| 查看: 4477 | 回复: 23 | |||
[交流]
【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因 已有14人参与
|
| 大家好，我构建表达载体连接PET-28A，已经连接多次但都失败，感受态细胞也换了几次，鉴定全是假阳性，这可能是什么原因呢，希望大家多多帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有252人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 请问用Vector NTI如何实现在pET28a中加入目的基因片段的谱图绘制。
已经有10人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教
已经有31人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 有人提取过PET-28a的质粒吗？
已经有18人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】表达载体构建不成功的原因
已经有27人回复
fungixx
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 3.458
- 金币: 19627.6
- 散金: 18645
- 红花: 118
- 沙发: 273
- 帖子: 13324
- 在线: 2030.7小时
- 虫号: 860534
- 注册: 2009-09-30
- 专业: 抗肿瘤药物药理
2楼2010-05-08 14:44:43
3楼2010-05-08 15:09:49
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
4楼2010-05-08 15:22:25
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
5楼2010-05-08 15:35:49
6楼2010-05-08 15:47:24
7楼2010-05-08 15:49:10
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:42:15
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:42:15
|
片段切好了就不会有问题 载体要好好切切 pET28a拷贝数很低 载体抽质粒时抽浓一些 切好一批量大的放着每次取个半微升以后省事 告诉我酶切位点 28a很大 5.5k克隆几百bp 会不会你鉴定的时候切下来的小片段太稀了没看见啊 倒个1.2%的胶 构建好以后抽浓点切 酶要过量 温育3h以上 跑胶再看 酶切鉴定 TAE就不用了 看不出什么来 直接抽提 kana用50就行 用普通的克隆菌 不要用BL21 等确定对了纯了再转BL21 你直接连接测序怎么办？ pET通用引物有的 但是中国很多公司给的不对 你在哪个城市 上海这边不行 我一般PCR产物测完了对了再连 |
8楼2010-05-08 16:32:15
9楼2010-05-08 16:51:02
lingn
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1785.8
- 散金: 1
- 帖子: 745
- 在线: 44.7小时
- 虫号: 1008653
- 注册: 2010-04-29
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2010-05-08 17:11:25
