24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4599  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhy19850501

[交流] 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因 已有14人参与

大家好,我构建表达载体连接PET-28A,已经连接多次但都失败,感受态细胞也换了几次,鉴定全是假阳性,这可能是什么原因呢,希望大家多多帮忙!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:50:34
你用的是蓝白筛选吗?如果是蓝白筛选,那么选的白斑就绝对不是空载,而是连接的片段太小,你没有看到而已,所以我有可能是质粒污染。但是污染也不可能没有阳性,那你没有阳性,很有可能还是连接的问题,没有连上是最大的原因。你连接的片段是PCR产物,还是胶回收产物,还是其他什么片段,浓度怎么样,长度多大
4楼2010-05-08 15:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1。提取过质粒吗,是空载体吗,会不会是某种酶没有切开啊,或者是片段或者是质粒。连接时片段的量一定要远高于载体的片段,至少片段:载体>3吧
2。感受态可能没有问题,毕竟有菌长起来,要是验证感受态的话,可以转点质粒看看。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-08 14:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy19850501

我的目的片段浓度可能比较低,但不至于一点都连不上吧,我提的质粒确实是空载。
3楼2010-05-08 15:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要完全避免空载体,你就把载体双酶切做空连对照再做吧。载体自连没有长起来就可以了,如果长得很多,那你的酶切有问题。
双酶切有问题你就单酶切。
生物资源交流QQ群:1044518333
5楼2010-05-08 15:35:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 327求调剂 +5 Xxjc1107. 2026-04-06 5/250 2026-04-06 21:43 by dongzh2009
[考研] 0854求调剂 +7 亨氏番茄沙司 2026-04-06 8/400 2026-04-06 17:27 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂 +11 熊二想上岸 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:21 by 醉翁wl
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-03 14/700 2026-04-05 18:20 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 环境285分,过六级,求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 311求调剂 +20 zchqwer 2026-04-01 22/1100 2026-04-03 22:09 by lglzsd
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 275学硕081000服从调剂到其他专业,保不住本专业了 +7 一只小小水牛 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:23 by alice-2022
[硕博家园] 博一被送出联培感觉不适应怎么办 +3 全村的狗 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:44 by 328838485
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
信息提示
请填处理意见