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zhy19850501

应助: (幼儿园)
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虫号: 1006614

[交流] 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因已有14人参与

大家好，我构建表达载体连接PET-28A，已经连接多次但都失败，感受态细胞也换了几次，鉴定全是假阳性，这可能是什么原因呢，希望大家多多帮忙！

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1楼2010-05-08 14:27:43

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

MolEPI: 3
应助: 1 (幼儿园)
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散金: 10
红花: 5
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在线: 66.6小时
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注册: 2009-12-17
性别: MM
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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:50:34

你用的是蓝白筛选吗？如果是蓝白筛选，那么选的白斑就绝对不是空载，而是连接的片段太小，你没有看到而已，所以我有可能是质粒污染。但是污染也不可能没有阳性，那你没有阳性，很有可能还是连接的问题，没有连上是最大的原因。你连接的片段是PCR产物，还是胶回收产物，还是其他什么片段，浓度怎么样，长度多大

赞一下(2人)

4楼2010-05-08 15:22:25

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