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[交流] 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因已有14人参与

大家好，我构建表达载体连接PET-28A，已经连接多次但都失败，感受态细胞也换了几次，鉴定全是假阳性，这可能是什么原因呢，希望大家多多帮忙！

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1楼 2010-05-08 14:27:43

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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2816.9
帖子: 393
在线: 11.4小时
虫号: 235785
注册: 2006-04-01
性别: GG
专业: 神经生物学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:42:15

片段切好了就不会有问题载体要好好切切
pET28a拷贝数很低载体抽质粒时抽浓一些切好一批量大的放着每次取个半微升以后省事
告诉我酶切位点
28a很大 5.5k克隆几百bp 会不会你鉴定的时候切下来的小片段太稀了没看见啊
倒个1.2%的胶构建好以后抽浓点切酶要过量温育3h以上跑胶再看
酶切鉴定 TAE就不用了看不出什么来直接抽提 kana用50就行用普通的克隆菌不要用BL21 等确定对了纯了再转BL21

你直接连接测序怎么办？ pET通用引物有的但是中国很多公司给的不对你在哪个城市上海这边不行我一般PCR产物测完了对了再连