24小时热门版块排行榜    

查看: 4453  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhy19850501

[交流] 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因 已有14人参与

大家好,我构建表达载体连接PET-28A,已经连接多次但都失败,感受态细胞也换了几次,鉴定全是假阳性,这可能是什么原因呢,希望大家多多帮忙!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy19850501

引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-05-08 16:32:15:
片段切好了就不会有问题 载体要好好切切
pET28a拷贝数很低 载体抽质粒时抽浓一些 切好一批量大的放着每次取个半微升以后省事
告诉我酶切位点
28a很大 5.5k克隆几百bp 会不会你鉴定的时候切下来的小片段太稀了没 ...

我的酶切位点是BamHI和HandIII,你是建议我把双酶切后的PET-28载体转化到克隆菌中吗,这怎么鉴定它的纯度?
9楼2010-05-08 16:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1。提取过质粒吗,是空载体吗,会不会是某种酶没有切开啊,或者是片段或者是质粒。连接时片段的量一定要远高于载体的片段,至少片段:载体>3吧
2。感受态可能没有问题,毕竟有菌长起来,要是验证感受态的话,可以转点质粒看看。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-08 14:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy19850501

我的目的片段浓度可能比较低,但不至于一点都连不上吧,我提的质粒确实是空载。
3楼2010-05-08 15:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-08 18:50:34
你用的是蓝白筛选吗?如果是蓝白筛选,那么选的白斑就绝对不是空载,而是连接的片段太小,你没有看到而已,所以我有可能是质粒污染。但是污染也不可能没有阳性,那你没有阳性,很有可能还是连接的问题,没有连上是最大的原因。你连接的片段是PCR产物,还是胶回收产物,还是其他什么片段,浓度怎么样,长度多大
4楼2010-05-08 15:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +5 孔志浩 2026-03-12 10/500 2026-03-16 09:01 by 余晖&
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程(085602)313 分,本科学科评估A类院校化学工程与工艺,诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见