【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因 - 分子生物 - 综合其他

燃烧吧，小宇宙~

21楼2012-04-18 17:05:22

zhuzhicheng

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如果是双酶切一定是载体没有完全切开形成很多单酶切的载体这样的载体连接效率比双酶切连外源片段效率高100倍就是说你挑100个菌才有一个可能是阳性这叫载体自连板子可以扔了

22楼2013-10-11 15:56:54

yuan爱

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9楼: Originally posted by zhy19850501 at 2010-05-08 16:51:02
我的酶切位点是BamHI和HandIII,你是建议我把双酶切后的PET-28载体转化到克隆菌中吗，这怎么鉴定它的纯度？...

你的酶切体系是什么呢

23楼2016-03-07 13:08:06

xfhysss-314

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8楼: Originally posted by chemifunan at 2010-05-08 16:32:15
片段切好了就不会有问题载体要好好切切
pET28a拷贝数很低载体抽质粒时抽浓一些切好一批量大的放着每次取个半微升以后省事
告诉我酶切位点
28a很大 5.5k克隆几百bp 会不会你鉴定的时候切下来的小片段太稀了没看 ...

你好，我最近在做表达载体的构建，其中双酶切之后载体和目的片段的条带都很亮，但是回收效率可能有点低，但是并不至于条带是淡淡的看不见，连好多次都没有成功，不知道是哪里出了问题，希望楼主帮忙分析一下，不胜感激！

24楼2018-12-18 15:30:30