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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求教电泳的基本问题
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蓝色雪狐

金虫 (正式写手)

欧洲漂流

[交流] 【求助/交流】求教电泳的基本问题 已有4人参与

各位虫友，小弟新近做电泳，主要做蛋白的，SDS-PAGE，也做PAGE。目前刚上手，因此想找本书了解一下电泳实验技术。请教各位，能否告知一本比较好的介绍电泳实验技术的书籍给小弟？如果方便，希望附上您的简单评论。谢谢！

不胜感激，谢谢！一点金币不成敬意……

[ Last edited by 蓝色雪狐 on 2010-5-1 at 20:56 ]
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1楼 2010-05-01 20:55:13
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guoenwen

金虫 (小有名气)
★ ★
蓝色雪狐(金币+2):谢谢交流经验心得~ 2010-05-02 10:13
1949stone(金币+2): 2010-05-02 14:35
没有太多讲究的，我们天天做，不过想跑的很漂亮，泳道上下条带都很清晰确实很难，看过老外有跑出很好的效果的。
说一下我做SDS-PAGE的经验吧，首先是把胶板做好，然后样品处理好也很关键，不要忘了离心一下，点样的时候尽量使样品在胶空里紧凑一些，正常电压跑出来，脱色的时候细致一点，不要脱过了就行。
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3楼2010-05-02 09:01:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)
蓝色雪狐(金币+1):谢谢 2010-05-04 11:02
要是表达量很高的话，按步骤来就可以，精准点就做WESTERNBLOT.
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4楼2010-05-04 10:30:43
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木星海

金虫 (正式写手)
★ ★
蓝色雪狐(金币+3):谢谢你的经验之谈~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金币+2):认真实验的MM，赞~~ 2010-05-04 12:23
我自己也经常做SDS-PAGE，只是有时候掌握不好 常常效果不怎么样
所以，我总结了几个要注意的小点，发现只要能好好注意这些方面，一般问题不大。
1、有专门的文章分析浓缩胶和分离胶的接缝不密合问题。找来看！
2、胶面比较脏，要检查染液是不是用的久了，可以用滤纸和漏斗过滤一下；
3、每次配完胶不要马上跑电泳，时间多的话，最好放上一天半天再用，因为刚做完的胶，看着是凝固了，但里面有可能还没有聚合；也尽量不要放到4度冰箱保存，SDS在低温下会结晶析出；
4、在做胶前，玻璃板要洗干净，可能之前有人做后玻璃板没有洗干净，有时候别人有手指印留在上面，有油性，影响蛋白质的迁移；
5、染色的时候要注意，染液要比较烫会好一些，我一般微波染色三次，第一次20s，第二、三次10s；加入SDS的量要根据蛋白质的含量来确定，跑胶之前可以先测一下蛋白含量，如果加入量太多，可能会导致蛋白稀释太厉害，也会挤着旁边的蛋白条带。
6、配胶的时候尽量把板放平，做好了胶，也不要去动它，不然会容易歪了，到时候蛋白质就不会在同一起跑线上了；
7、电泳时注意不要把电极插反；
8、脱色不宜太久，一般过夜后观察，如果没有脱干净，可以换上脱色液再在摇床上摇半个小时基本上就可以了。
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我爱小木虫！
5楼2010-05-04 10:50:19
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liyong1981

金虫 (正式写手)
同意楼上的～
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6楼2010-05-04 11:38:52
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