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蓝色雪狐

金虫 (正式写手)

欧洲漂流

[交流] 【求助/交流】求教电泳的基本问题 已有4人参与

各位虫友,小弟新近做电泳,主要做蛋白的,SDS-PAGE,也做PAGE。目前刚上手,因此想找本书了解一下电泳实验技术。请教各位,能否告知一本比较好的介绍电泳实验技术的书籍给小弟?如果方便,希望附上您的简单评论。谢谢!

不胜感激,谢谢!一点金币不成敬意……

[ Last edited by 蓝色雪狐 on 2010-5-1 at 20:56 ]
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蓝色雪狐

金虫 (正式写手)

欧洲漂流

还是自己顶一下
2楼2010-05-01 21:04:57
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guoenwen

金虫 (小有名气)

★ ★
蓝色雪狐(金币+2):谢谢交流经验心得~ 2010-05-02 10:13
1949stone(金币+2): 2010-05-02 14:35
没有太多讲究的,我们天天做,不过想跑的很漂亮,泳道上下条带都很清晰确实很难,看过老外有跑出很好的效果的。
说一下我做SDS-PAGE的经验吧,首先是把胶板做好,然后样品处理好也很关键,不要忘了离心一下,点样的时候尽量使样品在胶空里紧凑一些,正常电压跑出来,脱色的时候细致一点,不要脱过了就行。
3楼2010-05-02 09:01:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)


蓝色雪狐(金币+1):谢谢 2010-05-04 11:02
要是表达量很高的话,按步骤来就可以,精准点就做WESTERNBLOT.
4楼2010-05-04 10:30:43
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木星海

金虫 (正式写手)

★ ★
蓝色雪狐(金币+3):谢谢你的经验之谈~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金币+2):认真实验的MM,赞~~ 2010-05-04 12:23
我自己也经常做SDS-PAGE,只是有时候掌握不好 常常效果不怎么样
所以,我总结了几个要注意的小点,发现只要能好好注意这些方面,一般问题不大。
1、有专门的文章分析浓缩胶和分离胶的接缝不密合问题。找来看!
2、胶面比较脏,要检查染液是不是用的久了,可以用滤纸和漏斗过滤一下;
3、每次配完胶不要马上跑电泳,时间多的话,最好放上一天半天再用,因为刚做完的胶,看着是凝固了,但里面有可能还没有聚合;也尽量不要放到4度冰箱保存,SDS在低温下会结晶析出;
4、在做胶前,玻璃板要洗干净,可能之前有人做后玻璃板没有洗干净,有时候别人有手指印留在上面,有油性,影响蛋白质的迁移;
5、染色的时候要注意,染液要比较烫会好一些,我一般微波染色三次,第一次20s,第二、三次10s;加入SDS的量要根据蛋白质的含量来确定,跑胶之前可以先测一下蛋白含量,如果加入量太多,可能会导致蛋白稀释太厉害,也会挤着旁边的蛋白条带。
6、配胶的时候尽量把板放平,做好了胶,也不要去动它,不然会容易歪了,到时候蛋白质就不会在同一起跑线上了;
7、电泳时注意不要把电极插反;
8、脱色不宜太久,一般过夜后观察,如果没有脱干净,可以换上脱色液再在摇床上摇半个小时基本上就可以了。
我爱小木虫!
5楼2010-05-04 10:50:19
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liyong1981

金虫 (正式写手)


同意楼上的~
6楼2010-05-04 11:38:52
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