24小时热门版块排行榜    

查看: 2631  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低? 已有5人参与

我在用MBP tag表达蛋白,亲和纯化后得到的融合蛋白,测定活性。发现活性很低,用factor Xa酶切,切完之后跑电泳发现有MBP,目的蛋白却不见了,是怎么回事?小弟都要愁死啦,实验做不出来没法毕业啊!敬请各位高人指点!
大家都是怎么做的?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

一个人可以不成功,但不可以不成长!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

现在还没有测活性,不知效果如何!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
7楼2010-04-27 20:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

怎么无人理睬!?
一个人可以不成功,但不可以不成长!
2楼2010-04-24 09:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子

Anson1358(金币+6): 2010-04-24 17:51
使用MBP tag有一个问题,就是MBP表达效率太高,拖着后面的蛋白快速表达,而导致你的目的蛋白没有折叠好。
用蛋白酶切完后跑电泳,染胶的时候不要去掉浓缩胶,染完后注意看一下浓缩胶和分离胶之间是不是有一条带。如果有,那证明你的蛋白没有折叠好,切除前面的tag后聚集在一起形成大的复合体,跑不进分离胶。
如果出现这种情况,那你可以尝试在亲和纯化之后先过一个分子筛,看一下融合蛋白有没有聚集,把没有聚集的部分回收再用蛋白酶切。
如果依然聚集,那没办法了,换载体吧。
生命的海洋里,我是蓝色的一滴
3楼2010-04-24 10:56:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上的指点!要是低温诱导表达的话,会不会效果好一点?
一个人可以不成功,但不可以不成长!
4楼2010-04-25 10:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 生物学调剂 +3 Surekei 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:31 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
信息提示
请填处理意见