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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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我好暴躁啊

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 双酶切连接不成功 已有7人参与

双酶切连接这么难吗,怎么就连不上!目的片段3300,载体3000,酶是NEB的。,双酶切后10ulT4连接体系,体积比设了好几个,转化子长了好多,挑菌,菌液PCR都是假阳性,欲哭无泪( ˙-˙ ),该怎么办?

双酶切连接不成功


双酶切连接不成功-1


双酶切连接不成功-2


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我好暴躁啊

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-05-30 22:32:27
包给我做吧~~~呵呵。大片段本身就不太好连,另外,你酶切位点没有选紧邻的两个吧。。那样可能切不开哈。。然后,你回收片段关注下260/230,最好2左右,最差也要大于1.5,要么成功率会很低。

回收片段测浓度确实260/230不好,260都没有峰值。我是第一个酶切后65度灭火20min,然后直接加第二个酶,可是回收的时候浓度还是很低。切3ug,回收了60ng。T_T

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9楼2017-05-31 08:49:05
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macroH

管理员

2楼2017-05-30 22:01:09
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luoyl210

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我们一般克隆的假阳性比较多,亚克隆不太会出现假阳性

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3楼2017-05-30 22:13:28
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kangaroo0513

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:40:29
包给我做吧~~~呵呵。大片段本身就不太好连,另外,你酶切位点没有选紧邻的两个吧。。那样可能切不开哈。。然后,你回收片段关注下260/230,最好2左右,最差也要大于1.5,要么成功率会很低。
4楼2017-05-30 22:32:27
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