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Marado金虫 (正式写手)
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请大家帮忙分析一张酶切图，双酶切片段有点诡异
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所切质粒为pMD19-T（2692bp）连接有目的片段（1926bp），连接成功后总质粒大小为4618bp，酶切位点为：Not I与BamH I 如图所示： 单酶切验证质粒应该是连上了目的片段，但是Not I酶切效率极其低下，双酶切因此也好不到哪去，我用的Not I单酶切体系来自于说明书如下： 质粒：2ul Not I：1ul 10*H buffer：2ul 0.1%BSA：2ul 0.1%Tritonx-100：2ul 水：11ul 总计：20ul体系，过夜酶切，37℃ 从图中看出双酶切片段很多很杂，尤其是1000bp及以下的两条片段无法判断是什么，我目的片段中并不包含BamH I和Not I这两个酶切位点，难道我P出来的不是目的片段，而是非特异性条带   |
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Marado
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