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fenghuwuyu木虫 (正式写手)
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荧光定量PCR溶解曲线分析已有2人参与
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溶解曲线上62-63℃有峰出现是怎么回事，引物BLAST了特异性比较强，做了标曲也有梯度趋势，而且空白对照也有CT出现（大于35），引物污染经过重复试验也被排除 熔解曲线.jpg  标曲.jpg |
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fenghuwuyu
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6楼2017-01-30 21:20:44
peitaokong
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-01-30 22:19:21
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-01-30 22:19:21
| 出现这种情况，有两种可能。一个就是引物的非特异性扩增，63℃这个峰图代表的引物二聚体的等非特异性扩增条带。第二个可能就是RNA提取过程中乙醇类物质没有晾干，影响了后来的反转录，导致模板的质量不好，进而导致扩增的溶解曲线很差。不知道你这个是属于这两种情况的哪一种。至于你说的blast特异性和这个扩增的特异性他们是没有必然的联系的。blast只是理论上的，blast特异型好，只能说明理论上你这个引物不会扩增到别的同源性序列上，并不表示你这个引物在实际上就不会有出非特异性扩增。希望能够帮助你。 |
2楼2016-12-22 12:32:52
fenghuwuyu
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3楼2017-01-29 09:36:21
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4楼2017-01-29 09:45:32