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细菌荧光定量PCR溶解曲线出现非常接近双峰，阴性对照总是26、27起峰
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最近刚刚开始荧光定量，做标准曲线时稀释9个梯度，取第3-9梯度作为模板进行荧光定量。其中高浓度（3,4,5,6）Ct结果很好，但7、8、9和阴性对照起峰均在26、27左右，且随浓度减小Ct略微减小。看稀释曲线时出现双峰，Tm分别在85.3（高）和87（矮）左右，且随浓度降低85.3的峰变矮而87的峰变高（最高0.06）。阴性对照中87的峰高于85.3的峰。引物用的细菌荧光定量常见引物338和518，试剂为takara，退火53和55都试过了，结果一样。请问那个87的峰可能是引物二聚体吗？记得别人的引物二聚体貌似都没这么高。。 开始认为是水污染了，就重新买的DEPC水并在超净台里溶解引物，试剂是新买的，一直是在台子里打开，真的不知道是哪里污染了。。求大神们帮忙~~ |
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