应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 细菌荧光定量PCR溶解曲线出现非常接近双峰，阴性对照总是26、27起峰
11/1返回列表
查看: 2645  |  回复: 0
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

胖胖二妮子

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌荧光定量PCR溶解曲线出现非常接近双峰，阴性对照总是26、27起峰

最近刚刚开始荧光定量，做标准曲线时稀释9个梯度，取第3-9梯度作为模板进行荧光定量。其中高浓度（3,4,5,6）Ct结果很好，但7、8、9和阴性对照起峰均在26、27左右，且随浓度减小Ct略微减小。看稀释曲线时出现双峰，Tm分别在85.3（高）和87（矮）左右，且随浓度降低85.3的峰变矮而87的峰变高（最高0.06）。阴性对照中87的峰高于85.3的峰。引物用的细菌荧光定量常见引物338和518，试剂为takara，退火53和55都试过了，结果一样。请问那个87的峰可能是引物二聚体吗？记得别人的引物二聚体貌似都没这么高。。
        开始认为是水污染了，就重新买的DEPC水并在超净台里溶解引物，试剂是新买的，一直是在台子里打开，真的不知道是哪里污染了。。求大神们帮忙~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2014-01-15 16:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
相关版块跳转 我要订阅楼主 胖胖二妮子 的主题更新
11/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭