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清草XC

金虫 (正式写手)

[求助] western blot 转膜问题已有1人参与

最近在做蛋白印迹,转膜存在问题,如下图所示,我点了两个marker,最左边和中间的,转膜后能看到最左边的maker转到膜上了,但是中间的maker没有转过去,且用丽春红染色膜上样品无蛋白条带,用考马斯亮蓝对胶进行染色发现还有部分蛋白残留在胶上,主要集中在胶的中间部分,如下图所示:(转膜条件:300V,260mA,80min, 硝酸纤维素膜)请大家帮我分析下是怎么回事啊?

western blot 转膜问题
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

找有经验的做一次就行了
2楼2016-12-21 16:55:18
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一个不小心就

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

这个方法好!最省时间
3楼2016-12-21 19:28:02
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

问题已解决
4楼2016-12-24 10:11:01
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star013

新虫 (知名作家)

西门吹雪170: 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2016-12-24 21:18:53
本帖内容被屏蔽

5楼2016-12-24 13:55:47
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

我也 遇到相同的问题,请问你是怎么解决的?是什么原因造成的呢?
6楼2017-01-09 22:56:12
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-01-10 07:43:56
我也 遇到相同的问题,请问你是怎么解决的?是什么原因造成的呢?
7楼2017-01-09 22:57:37
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhuozhuo22 at 2017-01-09 22:57:37
我也 遇到相同的问题,请问你是怎么解决的?是什么原因造成的呢?

增加滤纸的厚度,六层滤纸,转膜条件是300v,300ma, 80min, 目的蛋白43kDa.
8楼2017-01-10 21:57:40
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 清草XC at 2017-01-10 21:57:40
增加滤纸的厚度,六层滤纸,转膜条件是300v,300ma, 80min, 目的蛋白43kDa....

300mA会不会太大了啊?我一般只用200MA,时间80-90分。转的也挺好的。滤纸是前后各三张,共6张。最近就出这样的问题,转完NC膜上中间部分有,上下都没有(以前是都有,能转100KD的),胶上的情况和你的MARKER右边的那两条一样,只是迷糊的蓝色,条带不清晰,感觉蛋白分散了一样。不知都哪里出问题了,条件没怎么改变,就是变得不顺利,时好时坏,像是碰运气。真是伤透心了。
9楼2017-01-17 21:37:17
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默阳希希

新虫 (小有名气)

我用120v啊,300是多大啊,不敢想象。

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-04-30 11:24:15
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