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20122347

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 已有4人参与

小辈最近在做western blot,一直显示不出条带,Marker 也没有条带,蛋白分子量比较小,请问一般蛋白上样量多少比较合适,我提的蛋白为18ng/ul,是不是浓度太低了,转膜我用的湿转,条件多少比较合适,还有没有多少实验条件可以改善,到底哪有问题,谢谢大神指点!
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王188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:43
20122347: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 万分感谢大神指点 2015-08-06 16:24:11
如果你的蛋白能到28以上就更好了,但是从你的mark都没有条带来看,应该是你的湿转,或者显色时候有问题,最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向,如果电极方向错了,你肯定转不上,另外显色的时候有问题,你可以试着加的量稍微大点
2楼2015-08-01 14:53:57
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:54
用的曝光marker吗?如果是marker都没有,说明操作是有问题的了,操作很多,不好分析,一一排除

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
3楼2015-08-03 08:20:07
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paspics

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:49:01
转膜时110V,一小时到1.5小时之间,蛋白上样量20微
4楼2015-08-03 12:42:03
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Marker都没条带肯定是转膜的问题,要么电极插反,要么时间太长转过,或者你的转膜液里没有加甲醇
转膜条件:100V 100min 这是我一直用的条件,没有问题,你试一下。
5楼2015-08-04 08:41:32
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20122347

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 王188 at 2015-08-01 14:53:57
如果你的蛋白能到28以上就更好了,但是从你的mark都没有条带来看,应该是你的湿转,或者显色时候有问题,最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向,如果电极方向错了,你肯定转不上,另外显色的时候有问题,你 ...

好的,我再试一试谢谢啦
6楼2015-08-06 16:25:06
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20122347

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-08-03 08:20:07
用的曝光marker吗?如果是marker都没有,说明操作是有问题的了,操作很多,不好分析,一一排除

非常感谢
7楼2015-08-06 16:27:52
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20122347

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by paspics at 2015-08-03 12:42:03
转膜时110V,一小时到1.5小时之间,蛋白上样量20微

好的,谢谢大神,我再试一下
8楼2015-08-06 16:29:22
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酷恋花

木虫 (正式写手)

先看胶上有没有蛋白,再看膜上有没有蛋白~一步一步排查

[ 发自小木虫客户端 ]
莫懈怠,时间不多了!
9楼2015-08-06 16:36:08
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