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20122347

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 已有4人参与

小辈最近在做western blot，一直显示不出条带，Marker 也没有条带，蛋白分子量比较小，请问一般蛋白上样量多少比较合适，我提的蛋白为18ng/ul，是不是浓度太低了，转膜我用的湿转，条件多少比较合适，还有没有多少实验条件可以改善，到底哪有问题，谢谢大神指点！
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1楼 2015-08-01 12:04:32
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王188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:43
20122347: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 万分感谢大神指点 2015-08-06 16:24:11
如果你的蛋白能到28以上就更好了，但是从你的mark都没有条带来看，应该是你的湿转，或者显色时候有问题，最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向，如果电极方向错了，你肯定转不上，另外显色的时候有问题，你可以试着加的量稍微大点
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2楼2015-08-01 14:53:57
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:54
用的曝光marker吗？如果是marker都没有，说明操作是有问题的了，操作很多，不好分析，一一排除

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天道酬勤
3楼2015-08-03 08:20:07
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paspics

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:49:01
转膜时110V，一小时到1.5小时之间，蛋白上样量20微
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4楼2015-08-03 12:42:03
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Marker都没条带肯定是转膜的问题，要么电极插反，要么时间太长转过，或者你的转膜液里没有加甲醇
转膜条件：100V 100min 这是我一直用的条件，没有问题，你试一下。
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5楼2015-08-04 08:41:32
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20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王188 at 2015-08-01 14:53:57
如果你的蛋白能到28以上就更好了，但是从你的mark都没有条带来看，应该是你的湿转，或者显色时候有问题，最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向，如果电极方向错了，你肯定转不上，另外显色的时候有问题，你 ...

好的，我再试一试谢谢啦
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6楼2015-08-06 16:25:06
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20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-08-03 08:20:07
用的曝光marker吗？如果是marker都没有，说明操作是有问题的了，操作很多，不好分析，一一排除

非常感谢
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7楼2015-08-06 16:27:52
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20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by paspics at 2015-08-03 12:42:03
转膜时110V，一小时到1.5小时之间，蛋白上样量20微

好的，谢谢大神，我再试一下
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8楼2015-08-06 16:29:22
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酷恋花

木虫 (正式写手)
先看胶上有没有蛋白，再看膜上有没有蛋白～一步一步排查

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莫懈怠，时间不多了！
9楼2015-08-06 16:36:08
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