应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » western blot
91/1返回列表
查看: 1544  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

20122347

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 已有4人参与

小辈最近在做western blot，一直显示不出条带，Marker 也没有条带，蛋白分子量比较小，请问一般蛋白上样量多少比较合适，我提的蛋白为18ng/ul，是不是浓度太低了，转膜我用的湿转，条件多少比较合适，还有没有多少实验条件可以改善，到底哪有问题，谢谢大神指点！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-08-01 12:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:43
20122347: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 万分感谢大神指点 2015-08-06 16:24:11
如果你的蛋白能到28以上就更好了，但是从你的mark都没有条带来看，应该是你的湿转，或者显色时候有问题，最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向，如果电极方向错了，你肯定转不上，另外显色的时候有问题，你可以试着加的量稍微大点
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-08-01 14:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:48:54
用的曝光marker吗？如果是marker都没有，说明操作是有问题的了，操作很多，不好分析，一一排除

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
天道酬勤
3楼2015-08-03 08:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paspics

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-08-03 13:49:01
转膜时110V，一小时到1.5小时之间，蛋白上样量20微
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-03 12:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Marker都没条带肯定是转膜的问题，要么电极插反，要么时间太长转过，或者你的转膜液里没有加甲醇
转膜条件：100V 100min 这是我一直用的条件，没有问题，你试一下。
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-04 08:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王188 at 2015-08-01 14:53:57
如果你的蛋白能到28以上就更好了，但是从你的mark都没有条带来看，应该是你的湿转，或者显色时候有问题，最应该注意的就是湿转的时候你别弄错了电极方向，如果电极方向错了，你肯定转不上，另外显色的时候有问题，你 ...

好的，我再试一试谢谢啦
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-06 16:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-08-03 08:20:07
用的曝光marker吗？如果是marker都没有，说明操作是有问题的了，操作很多，不好分析，一一排除

非常感谢
回复此楼
7楼2015-08-06 16:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20122347

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by paspics at 2015-08-03 12:42:03
转膜时110V，一小时到1.5小时之间，蛋白上样量20微

好的，谢谢大神，我再试一下
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-06 16:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酷恋花

木虫 (正式写手)
先看胶上有没有蛋白，再看膜上有没有蛋白～一步一步排查

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
莫懈怠，时间不多了！
9楼2015-08-06 16:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 20122347 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] FileCode能看出啥？ +4 要乐观耀哥 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:02 by 天神眷顾
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭