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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot湿转的那个三明治怎样操作可以减少气泡？
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot湿转的那个三明治怎样操作可以减少气泡？

最近做的WB转出来的膜总是很花的感觉。感觉是三明治在最后夹的时候产生了气泡。而气泡在膜与胶结合后已经确定赶走了。大家有遇到这种情况吗？怎样操作可以解决这个问题呢？
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1楼 2013-10-01 21:28:45
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DAX1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香分子生物期待你的精彩。 2013-10-01 21:36:12
如果你都用玻璃棒赶走气泡，应该就不会有啊，不知道你的架子会不会太紧或者太松，这样都不好，太紧考虑找个用很久的海绵，厚度会薄点。松的话多加几张滤纸可能会好点。
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2楼2013-10-01 21:31:39
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sylar1022

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:49:02
膜很花应该不是气泡问题吧…可能是膜或者转膜液，转膜电压电流的问题…用pvdf膜要用甲醇活化一下，电压电流也不要太大，要记得放冰降温

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3楼2013-10-01 21:51:01
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by DAX1 at 2013-10-01 21:31:39
如果你都用玻璃棒赶走气泡，应该就不会有啊，不知道你的架子会不会太紧或者太松，这样都不好，太紧考虑找个用很久的海绵，厚度会薄点。松的话多加几张滤纸可能会好点。

关键就是感觉调整了好像还是没用啊。怀疑不够紧调整过，加过滤纸。每次都是三明治最下方的膜OK。其他的就是丽春红染出来有气泡一类东西在里面的感觉。扫出来的膜也是一样。感觉比较花。。。
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4楼2013-10-01 22:07:03
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sylar1022 at 2013-10-01 21:51:01
膜很花应该不是气泡问题吧…可能是膜或者转膜液，转膜电压电流的问题…用pvdf膜要用甲醇活化一下，电压电流也不要太大，要记得放冰降温

应该排除了其他问题了。因为所有的条件以前都摸过。膜也泡过。感觉很大的可能应该是三明治夹的时候的问题。因为每次都是下方OK。上面像有气泡一样的东西。关键就是每次膜放上去时气泡都确认赶走了呀。难道是关夹子有什么技巧吗？他们也有人建议说他们在水下操作什么的。但是我们没有那个设备呀。
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5楼2013-10-01 22:09:59
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DAX1

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by herjasmine at 2013-10-01 22:07:03
关键就是感觉调整了好像还是没用啊。怀疑不够紧调整过，加过滤纸。每次都是三明治最下方的膜OK。其他的就是丽春红染出来有气泡一类东西在里面的感觉。扫出来的膜也是一样。感觉比较花。。。...

不是很明白你的意思。什么胶最下方的膜？难道一个夹子不是只放一个膜吗？还是你们的转膜系统我没见过。一直用的是biorad的，好像一个夹子就放一个膜吧。两边个一张厚滤纸。
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6楼2013-10-01 22:17:49
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by DAX1 at 2013-10-01 22:17:49
不是很明白你的意思。什么胶最下方的膜？难道一个夹子不是只放一个膜吗？还是你们的转膜系统我没见过。一直用的是biorad的，好像一个夹子就放一个膜吧。两边个一张厚滤纸。...

我用的也是BIORAD的。是三明治最下方。我一个夹子放4张膜也是转出来过的呀。但是有时就是靠近夹子上方的膜转出来会有气泡的感觉。但是每次最下面的膜都没问题。
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7楼2013-10-01 23:11:54
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DAX1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by herjasmine at 2013-10-01 23:11:54
我用的也是BIORAD的。是三明治最下方。我一个夹子放4张膜也是转出来过的呀。但是有时就是靠近夹子上方的膜转出来会有气泡的感觉。但是每次最下面的膜都没问题。...

从来没那样子转过。一个夹子放4张膜四个胶不会损坏夹子吗？你们实验室缺转膜槽？为什么不按标准的一个槽子一个膜啊。
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herjasmine
8楼2013-10-01 23:17:11
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sylar1022

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by herjasmine at 2013-10-01 22:09:59
应该排除了其他问题了。因为所有的条件以前都摸过。膜也泡过。感觉很大的可能应该是三明治夹的时候的问题。因为每次都是下方OK。上面像有气泡一样的东西。关键就是每次膜放上去时气泡都确认赶走了呀。难道是关夹子 ...

水下操作?…不就直接拿个盘子装上电泳液操作么…

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9楼2013-10-02 07:20:12
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by DAX1 at 2013-10-01 23:17:11
从来没那样子转过。一个夹子放4张膜四个胶不会损坏夹子吗？你们实验室缺转膜槽？为什么不按标准的一个槽子一个膜啊。...

昨天您说过后我回去想了想。有道理。考虑之后还是一个夹子一张膜试试。有可能出现花的情况也跟这个一个夹子转的膜太多有关。
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10楼2013-10-02 09:58:54
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