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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot湿转的那个三明治怎样操作可以减少气泡？
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot湿转的那个三明治怎样操作可以减少气泡？

最近做的WB转出来的膜总是很花的感觉。感觉是三明治在最后夹的时候产生了气泡。而气泡在膜与胶结合后已经确定赶走了。大家有遇到这种情况吗？怎样操作可以解决这个问题呢？
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1楼 2013-10-01 21:28:45
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sylar1022

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:49:02
膜很花应该不是气泡问题吧…可能是膜或者转膜液，转膜电压电流的问题…用pvdf膜要用甲醇活化一下，电压电流也不要太大，要记得放冰降温

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2013-10-01 21:51:01
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DAX1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香分子生物期待你的精彩。 2013-10-01 21:36:12
如果你都用玻璃棒赶走气泡，应该就不会有啊，不知道你的架子会不会太紧或者太松，这样都不好，太紧考虑找个用很久的海绵，厚度会薄点。松的话多加几张滤纸可能会好点。
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2楼2013-10-01 21:31:39
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by DAX1 at 2013-10-01 21:31:39
如果你都用玻璃棒赶走气泡，应该就不会有啊，不知道你的架子会不会太紧或者太松，这样都不好，太紧考虑找个用很久的海绵，厚度会薄点。松的话多加几张滤纸可能会好点。

关键就是感觉调整了好像还是没用啊。怀疑不够紧调整过，加过滤纸。每次都是三明治最下方的膜OK。其他的就是丽春红染出来有气泡一类东西在里面的感觉。扫出来的膜也是一样。感觉比较花。。。
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4楼2013-10-01 22:07:03
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sylar1022 at 2013-10-01 21:51:01
膜很花应该不是气泡问题吧…可能是膜或者转膜液，转膜电压电流的问题…用pvdf膜要用甲醇活化一下，电压电流也不要太大，要记得放冰降温

应该排除了其他问题了。因为所有的条件以前都摸过。膜也泡过。感觉很大的可能应该是三明治夹的时候的问题。因为每次都是下方OK。上面像有气泡一样的东西。关键就是每次膜放上去时气泡都确认赶走了呀。难道是关夹子有什么技巧吗？他们也有人建议说他们在水下操作什么的。但是我们没有那个设备呀。
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5楼2013-10-01 22:09:59
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