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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » western blot 转膜问题
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清草XC

金虫 (正式写手)

[求助] western blot 转膜问题 已有1人参与

最近在做蛋白印迹，转膜存在问题，如下图所示，我点了两个marker，最左边和中间的，转膜后能看到最左边的maker转到膜上了，但是中间的maker没有转过去，且用丽春红染色膜上样品无蛋白条带，用考马斯亮蓝对胶进行染色发现还有部分蛋白残留在胶上，主要集中在胶的中间部分，如下图所示：（转膜条件：300V,260mA,80min, 硝酸纤维素膜）请大家帮我分析下是怎么回事啊？

western blot 转膜问题
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1楼 2016-12-20 21:38:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
找有经验的做一次就行了
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2楼2016-12-21 16:55:18
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

这个方法好！最省时间
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3楼2016-12-21 19:28:02
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

问题已解决
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4楼2016-12-24 10:11:01
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star013

新虫 (知名作家)
西门吹雪170: 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2016-12-24 21:18:53
本帖内容被屏蔽
5楼2016-12-24 13:55:47
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-21 16:55:18
找有经验的做一次就行了

我也 遇到相同的问题，请问你是怎么解决的？是什么原因造成的呢？
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6楼2017-01-09 22:56:12
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-01-10 07:43:56
我也 遇到相同的问题，请问你是怎么解决的？是什么原因造成的呢？
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7楼2017-01-09 22:57:37
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhuozhuo22 at 2017-01-09 22:57:37
我也 遇到相同的问题，请问你是怎么解决的？是什么原因造成的呢？

增加滤纸的厚度，六层滤纸，转膜条件是300v,300ma, 80min, 目的蛋白43kDa.
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8楼2017-01-10 21:57:40
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zhuozhuo22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 清草XC at 2017-01-10 21:57:40
增加滤纸的厚度，六层滤纸，转膜条件是300v,300ma, 80min, 目的蛋白43kDa....

300mA会不会太大了啊？我一般只用200MA，时间80-90分。转的也挺好的。滤纸是前后各三张，共6张。最近就出这样的问题，转完NC膜上中间部分有，上下都没有（以前是都有，能转100KD的），胶上的情况和你的MARKER右边的那两条一样，只是迷糊的蓝色，条带不清晰，感觉蛋白分散了一样。不知都哪里出问题了，条件没怎么改变，就是变得不顺利，时好时坏，像是碰运气。真是伤透心了。
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9楼2017-01-17 21:37:17
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默阳希希

新虫 (小有名气)
我用120v啊，300是多大啊，不敢想象。

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10楼2017-04-30 11:24:15
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