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liuxycsu

新虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 转膜相关问题

刚刚接触实验，最近Western总是在转膜上出问题。
我们用的是NC膜，湿转，100V，1.5h。
10*转膜液：tris 151.1g，甘氨酸30.3g，定容至1000ml
最开始几次，用之前剩下的10*转膜液，一切正常，起始电压就能到达100V，电流在250mA，最后电流也不超过300mA。
自己配了一次转膜液后，电压一开始总是不能达到100V（90左右），就自动转成恒流了（我设置了最高电流300mV），今晚上更过分，电压只能到达70V，前10多分钟，电压逐渐下降到50V，之后慢慢上升最后维持在80V上下。
我转了2个小时，看maker的效果也还是不错。
我还是比较疑惑，为什么会有这样的电压变化。

转膜液有问题，还是温度，最开始转膜液温度稍高，慢慢被周围冰浴降低，电压上升？

谢谢
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1楼 2011-06-14 00:10:14
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jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-18 21:55:22
看楼主的情况，如果能排除电泳仪的问题或操作不对的话，你的转膜电泳缓冲液有问题，楼主单位没写错的话，那离子浓度可就太高了啊一般的转膜缓冲液体系根本没那么高的   我们实验室用的体系大概是:   tris 12mM，giy 96mM，一般可以有变动，加倍或减倍都行，但楼主的体系好像浓度远远高了，不妨将缓冲液离子浓度降一下再试试。
赞一下(1人) 回复此楼
互相帮助！
2楼2011-06-18 18:05:59
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good! 2011-06-18 22:15:02
温度很重要，
不同温度，电压，电流确实有很大变化（看你选恒流还是恒压），我们一直选恒流300mA
包括电泳也是，冰浴与不浴，确实有变化。一般温度低，离子活动较弱，电流或电压较低，

离子浓度确实高了，可以按楼上的方法
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3楼2011-06-18 19:26:22
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