24小时热门版块排行榜

南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知（长期有效）

返回列表

liuxycsu

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 19.5
帖子: 2
在线: 49分钟
虫号: 1258878
注册: 2011-04-08
专业: 分娩与产褥

[求助] Western Blot 转膜相关问题

刚刚接触实验，最近Western总是在转膜上出问题。
我们用的是NC膜，湿转，100V，1.5h。
10*转膜液：tris 151.1g，甘氨酸30.3g，定容至1000ml
最开始几次，用之前剩下的10*转膜液，一切正常，起始电压就能到达100V，电流在250mA，最后电流也不超过300mA。
自己配了一次转膜液后，电压一开始总是不能达到100V（90左右），就自动转成恒流了（我设置了最高电流300mV），今晚上更过分，电压只能到达70V，前10多分钟，电压逐渐下降到50V，之后慢慢上升最后维持在80V上下。
我转了2个小时，看maker的效果也还是不错。
我还是比较疑惑，为什么会有这样的电压变化。

转膜液有问题，还是温度，最开始转膜液温度稍高，慢慢被周围冰浴降低，电压上升？

谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有250人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

western blot中蛋白质转印问题已经有17人回复
western blot时marker问题求助已经有18人回复
Western blot中出现的问题-求高手指点已经有17人回复
关于western blot转膜已经有20人回复
新手求助western blot 已经有22人回复
【求助/交流】western blot 缺带断带已经有21人回复
【求助/交流】western blot 已经有35人回复
【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题已经有10人回复
western blot 半干转膜后，发现条带个别缺失，不知道什么原因，请教各位已经有1人回复
【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题已经有9人回复
【求助/交流】有关western-blot的一些问题已经有18人回复
Western Blot 磷酸化蛋白测定问题已经有9人回复
western blot 转膜问题期待高手解答已经有10人回复

1楼2011-06-14 00:10:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jsk10

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1295.9
散金: 220
帖子: 440
在线: 248.6小时
虫号: 1321401
注册: 2011-06-12
性别: GG
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-18 21:55:22

看楼主的情况，如果能排除电泳仪的问题或操作不对的话，你的转膜电泳缓冲液有问题，楼主单位没写错的话，那离子浓度可就太高了啊一般的转膜缓冲液体系根本没那么高的我们实验室用的体系大概是: tris 12mM，giy 96mM，一般可以有变动，加倍或减倍都行，但楼主的体系好像浓度远远高了，不妨将缓冲液离子浓度降一下再试试。