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liuxycsu

新虫 (初入文坛)

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[求助] Western Blot 转膜相关问题

刚刚接触实验，最近Western总是在转膜上出问题。
我们用的是NC膜，湿转，100V，1.5h。
10*转膜液：tris 151.1g，甘氨酸30.3g，定容至1000ml
最开始几次，用之前剩下的10*转膜液，一切正常，起始电压就能到达100V，电流在250mA，最后电流也不超过300mA。
自己配了一次转膜液后，电压一开始总是不能达到100V（90左右），就自动转成恒流了（我设置了最高电流300mV），今晚上更过分，电压只能到达70V，前10多分钟，电压逐渐下降到50V，之后慢慢上升最后维持在80V上下。
我转了2个小时，看maker的效果也还是不错。
我还是比较疑惑，为什么会有这样的电压变化。

转膜液有问题，还是温度，最开始转膜液温度稍高，慢慢被周围冰浴降低，电压上升？

谢谢

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1楼 2011-06-14 00:10:14

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jsk10

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-18 21:55:22

看楼主的情况，如果能排除电泳仪的问题或操作不对的话，你的转膜电泳缓冲液有问题，楼主单位没写错的话，那离子浓度可就太高了啊一般的转膜缓冲液体系根本没那么高的我们实验室用的体系大概是: tris 12mM，giy 96mM，一般可以有变动，加倍或减倍都行，但楼主的体系好像浓度远远高了，不妨将缓冲液离子浓度降一下再试试。