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western blot 转膜问题!已有6人参与
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一共上样上四个孔道，蛋白大小都是14KD左右，SDS-page的胶考染后都能看见条带，但是跑Western blot竟然有的没出来。。。。 我是恒压湿转，100v，电流一开始0.7A，结束时1.5A，转50min，是转膜有问题吗？请各位分析一下~~ 谢啦！！ |
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sunrq516516
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2楼2014-05-14 17:57:39
jurkat.1640
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3楼2014-05-15 09:52:07
，那应该多少呢。。。胶没有化，预染marker转的很清楚。。。。4楼2014-05-15 11:39:13
Rubisco580
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5楼2014-05-15 15:42:54
jurkat.1640
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6楼2014-05-15 16:24:25
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你的转膜液配方是什么？7. TRANSFER BUFFER pH 8.3 a. Tris Base 3.03g 6.06g 9.09g 12.12g b. Glycine 14.4g 28.8g 43.2g 57.6g c. Methanol 200mL 400mL 600mL 800mL d. MilliQ final volume 1L 2L 3L 4L i. When made accurately, pH should be in the range of 8.1-8.4. DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH ii. Store at 4C can be reused 2-3x. Do not discard down sink, must be sent to EH and S chemical waste disposal 参考一下吧，做不出来 可以先做一个内参蛋白。 |
7楼2014-05-15 21:29:09
张力民1598
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