| 查看: 11433 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
一对引物扩增，出现两条带 已有5人参与
|
|||
| 大家好，小弟最近碰到问题，请大家帮帮忙解决一下。情况是这样的，我用的是Takara的一个载体，在载体上连接了我的目的片段1200bp左右。转化后，用该载体的通用引物扩增，出现了两条带，一条1200bp左右（可能就是我的目的带），一条3000bp左右，且这两条带都很暗。同时，我又用我目的片段的引物扩增，只出现大小相符的目的带。送去测序，引物为目的基因引物时，测序结果与我的目的基因序列相符，证明目的基因是插进去了；但当我用载体的通用引物测序时，就测不出来了。我也尝试胶回收3000bp处的条带链接T载体测序，但由于条带很暗，胶回收后浓度很低，与T载体链接没有成功。请各位大侠帮我分析下。不甚感激 |
回复此楼» 猜你喜欢
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有165人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测序结果少了500bp可是PCR结果完全正确
已经有8人回复
- 眼下在做关于青枯病的课题 出了问题难以解决
已经有7人回复
- RACE 基因克隆 出现两条带
已经有4人回复
- PCR产物异常，空白对照出现条带，求解！
已经有10人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
已经有18人回复
- 测序结果出现单碱基的重叠峰
已经有6人回复
- Vemurafenib：首个获批的抗BRAF突变肿瘤药
已经有1人回复
- race-pcr技术的简介
已经有2人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 一种比较详细的PCR技术
已经有10人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 帮忙翻译一篇摘要，要专业的，谢谢
已经有3人回复
|
非常感谢您的回答。 可能我的表述不是很清楚。是这样的，我有一段目的片段，用两端带有酶切位点的引物扩增，然后将PCR产物连接入T载体。这时测序是拿的我扩增的引物测序的（那时候觉得用扩增引物测序也是可以的），测序结果表明有我的目的条带，序列正确。然后，我开始表达载体的构建，双酶切构建的T载质粒，回收大小符合的目的片段，与经双酶切的表达载体做连接转化，挑取了两株阳性克隆（这是用菌落PCR鉴定的，用的引物也是目的片段的引物），这时，诡异的出现了，若用目的片段扩增引物扩增阳性转化子质粒，出现一条带（条带很明显），若用表达载体的通用引物去扩增，则出现两条带（一条3000bp左右，一条1500bp左右，我的目的条带大小是1100bp左右，通用引物中间序列300bp左右），拿转化子质粒测序，通用引物测不出来，目的片段扩增引物能测出来。就是这样的，不知道哪里出现问题。望大家帮忙想想办法，非常感谢。 构建了不止两次，只有两次构建长出了阳性克隆，挑出的转化子都是这种情况。 |
9楼2016-12-29 11:54:03
winyuyuyu123
金虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 813.3
- 红花: 2
- 帖子: 68
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 4912791
- 注册: 2016-08-12
- 专业: 病原真菌学
2楼2016-11-29 09:05:31
3楼2016-12-01 11:50:13
Alice 2016
铁虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 565.5
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 72
- 在线: 14.7小时
- 虫号: 4502093
- 注册: 2016-03-14
- 专业: 生物化学
4楼2016-12-02 16:51:45
30