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一对引物扩增，出现两条带 已有5人参与
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| 大家好，小弟最近碰到问题，请大家帮帮忙解决一下。情况是这样的，我用的是Takara的一个载体，在载体上连接了我的目的片段1200bp左右。转化后，用该载体的通用引物扩增，出现了两条带，一条1200bp左右（可能就是我的目的带），一条3000bp左右，且这两条带都很暗。同时，我又用我目的片段的引物扩增，只出现大小相符的目的带。送去测序，引物为目的基因引物时，测序结果与我的目的基因序列相符，证明目的基因是插进去了；但当我用载体的通用引物测序时，就测不出来了。我也尝试胶回收3000bp处的条带链接T载体测序，但由于条带很暗，胶回收后浓度很低，与T载体链接没有成功。请各位大侠帮我分析下。不甚感激 |
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yujiaping1
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你的通用引物和载体全部序列Blast一下，显然有两个结合位点，不然空载不应该出两条带，排除空载体两条带的问题，你后续的实验才能解决。不过你测序的结果（3000多的）如果能比对到完整的序列，且插入位点正确，那么我基本可以判断，酶切连接成功，换通用引物，之前的问题就不存在了。 另外，楼上说同一个菌转入多个质粒，就必须重新连接，其实可以提质粒重新转化，挑单克隆。 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2016-12-26 15:22:09
2楼2016-11-29 09:05:31
3楼2016-12-01 11:50:13
Alice 2016
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