| 查看: 11411 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
一对引物扩增，出现两条带 已有5人参与
|
|||
| 大家好，小弟最近碰到问题，请大家帮帮忙解决一下。情况是这样的，我用的是Takara的一个载体，在载体上连接了我的目的片段1200bp左右。转化后，用该载体的通用引物扩增，出现了两条带，一条1200bp左右（可能就是我的目的带），一条3000bp左右，且这两条带都很暗。同时，我又用我目的片段的引物扩增，只出现大小相符的目的带。送去测序，引物为目的基因引物时，测序结果与我的目的基因序列相符，证明目的基因是插进去了；但当我用载体的通用引物测序时，就测不出来了。我也尝试胶回收3000bp处的条带链接T载体测序，但由于条带很暗，胶回收后浓度很低，与T载体链接没有成功。请各位大侠帮我分析下。不甚感激 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有202人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测序结果少了500bp可是PCR结果完全正确
已经有8人回复
- 眼下在做关于青枯病的课题 出了问题难以解决
已经有7人回复
- RACE 基因克隆 出现两条带
已经有4人回复
- PCR产物异常，空白对照出现条带，求解！
已经有10人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
已经有18人回复
- 测序结果出现单碱基的重叠峰
已经有6人回复
- Vemurafenib：首个获批的抗BRAF突变肿瘤药
已经有1人回复
- race-pcr技术的简介
已经有2人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 一种比较详细的PCR技术
已经有10人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 帮忙翻译一篇摘要，要专业的，谢谢
已经有3人回复
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
|
你的通用引物和载体全部序列Blast一下，显然有两个结合位点，不然空载不应该出两条带，排除空载体两条带的问题，你后续的实验才能解决。不过你测序的结果（3000多的）如果能比对到完整的序列，且插入位点正确，那么我基本可以判断，酶切连接成功，换通用引物，之前的问题就不存在了。 另外，楼上说同一个菌转入多个质粒，就必须重新连接，其实可以提质粒重新转化，挑单克隆。 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2016-12-26 15:22:09
winyuyuyu123
金虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 813.3
- 红花: 2
- 帖子: 68
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 4912791
- 注册: 2016-08-12
- 专业: 病原真菌学
2楼2016-11-29 09:05:31
3楼2016-12-01 11:50:13
Alice 2016
铁虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 565.5
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 72
- 在线: 14.7小时
- 虫号: 4502093
- 注册: 2016-03-14
- 专业: 生物化学
4楼2016-12-02 16:51:45
20