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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化不长菌
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌 已有11人参与

昨天我做了4个转化。
1.未加卡那的感受态—长了大量密密麻麻的菌
2.加卡那的感受态—不长
3.加卡那未酶切质粒的感受态—不长
4.加卡那重组克隆感受态—不长
1说明感受态是活的，2说明卡那没失效，3说明质粒没导进去或质粒错误或感受态感受状态不好？
求大神有时间帮我看下

@wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-10-16 11:50:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体构建这么简单，你找个师姐或师哥，请人吃几顿饭，就搞定了呀。有人请我吃饭，我三天就给你连完。
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采菊东篱下，悠然见南山。
11楼2016-10-17 08:33:33
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朱庆平

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般转化的操作步骤简单，出现的问题也不大，如果非要说转化失败，最大的原因可能是你的感受态接收外来DNA的能力有问题；而综合3和4的结果来看，要么是你的质粒载体有问题，要么是你的感受态接受外来DNA的能力有问题，所以我建议你更换载体和感受态。感受态比起载体要便宜许多，所以先建议你更换感受态来做实验，如果结果还是不好，再更换载体吧！
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31楼2016-10-17 20:33:52
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普通回帖

zeyuanzi

新虫 (小有名气)
质粒已去磷酸化回收，基因也酶切回收了

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2楼2016-10-16 11:50:34
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
我只求帮我分析一下，问题出在哪，大致方向

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3楼2016-10-16 12:00:04
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-16 22:21:49
3说明质粒转化失败或者质粒状态不好
4说明构建失败，可能酶切、连接、转化出现问题

建议逐一排除可能的问题
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4楼2016-10-16 13:24:12
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-10-16 13:24:12
3说明质粒转化失败或者质粒状态不好
4说明构建失败，可能酶切、连接、转化出现问题

建议逐一排除可能的问题

3质粒转化失败是感受态细胞的问题？4的因素好多，如何选一个方向入手

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5楼2016-10-16 13:55:17
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
范围好大，谁能指导一下我的可能出错点？

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6楼2016-10-16 14:50:25
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定一下，质粒是抗卡那的吗
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7楼2016-10-16 16:07:17
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-10-16 16:07:17
确定一下，质粒是抗卡那的吗

确定过了，是

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8楼2016-10-16 18:12:16
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
求解答

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9楼2016-10-16 21:15:04
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
求解答，要不，毕不了业了

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10楼2016-10-17 08:21:05
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