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朱庆平

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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一般转化的操作步骤简单,出现的问题也不大,如果非要说转化失败,最大的原因可能是你的感受态接收外来DNA的能力有问题;而综合3和4的结果来看,要么是你的质粒载体有问题,要么是你的感受态接受外来DNA的能力有问题,所以我建议你更换载体和感受态。感受态比起载体要便宜许多,所以先建议你更换感受态来做实验,如果结果还是不好,再更换载体吧!
31楼2016-10-17 20:33:52
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朱庆平

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 08:46:50
3没导进去或是质粒的问题,好烦,感觉毕不了业了
...

3没导进去,我感觉是你的感受态的问题,你换个感受态试试啊,我们实验室都是买的感受态,你们是买的?还是自己做的?
32楼2016-10-17 20:41:54
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论坛小虫虫

至尊木虫 (著名写手)

先从做一遍,每步做完都跑下胶,然后再链接一遍,然后重新倒平板,确定是卡那并且浓度没有问题

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33楼2016-10-17 20:58:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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3没长说明转化失败了,如果质粒没问题的话,就是感受态转化率太低,重新做吧

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···
34楼2016-10-17 21:26:07
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
32楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-10-17 20:41:54
3没导进去,我感觉是你的感受态的问题,你换个感受态试试啊,我们实验室都是买的感受态,你们是买的?还是自己做的?...

自己做的

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35楼2016-10-17 22:29:48
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
34楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-17 21:26:07
3没长说明转化失败了,如果质粒没问题的话,就是感受态转化率太低,重新做吧

在重做了,其实我做三次了

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36楼2016-10-17 22:30:04
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
33楼: Originally posted by 论坛小虫虫 at 2016-10-17 20:58:54
先从做一遍,每步做完都跑下胶,然后再链接一遍,然后重新倒平板,确定是卡那并且浓度没有问题

卡那浓度是老师指导的,50什么来着,我忘记了

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37楼2016-10-17 22:30:42
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
31楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-10-17 20:33:52
一般转化的操作步骤简单,出现的问题也不大,如果非要说转化失败,最大的原因可能是你的感受态接收外来DNA的能力有问题;而综合3和4的结果来看,要么是你的质粒载体有问题,要么是你的感受态接受外来DNA的能力有问题 ...

感受态在重做了,质粒当时电泳是正常的,应该没错的

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38楼2016-10-17 22:31:59
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
30楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-10-17 18:46:23
去磷酸化后会切胶回收吗?如果回收就点1ul跑个电泳看看带。如果不回收的就跑一下回收的片段。片段回收后有Nano就测个浓度,没条件的就跑胶

是切胶回收的,当时跑5ul体系还是有亮度的

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39楼2016-10-17 22:33:02
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
36楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 22:30:04
在重做了,其实我做三次了
...

加质粒转化一直没长吗?

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···
40楼2016-10-17 22:42:45
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