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阿静

金虫 (正式写手)

又将踏入新的旅程
61楼2016-10-20 02:03:19
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hattie919822

银虫 (初入文坛)

重组质粒那一块可以从以下几个方面分析:酶切之后电泳酶切后的载体 看看是否被切开 验证内切酶活性 切开后的质粒是线性的 跑的会比超螺旋得慢 2,目的基因PCR回收纯化3,载体酶切之后去磷酸化再连接,4转化的时候做一个对照 就是未酶切的载体转化

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不见不知不伴不惜不
62楼2016-10-20 12:05:25
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star013

新虫 (知名作家)


63楼2016-10-20 12:48:10
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feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

3.加卡那未酶切质粒的感受态—不长 如果你确定你的原始质粒和酶切连接后质粒抗性是一样的  那问题就可能不是酶切回收连接造成的 因为你转质粒也不成功啊 你抗生素的浓度没问题吧 你用的转化方法正确吗
64楼2016-10-20 15:24:43
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
64楼: Originally posted by feierorange at 2016-10-20 15:24:43
3.加卡那未酶切质粒的感受态—不长 如果你确定你的原始质粒和酶切连接后质粒抗性是一样的  那问题就可能不是酶切回收连接造成的 因为你转质粒也不成功啊 你抗生素的浓度没问题吧 你用的转化方法正确吗

抗生素是卡那,加的浓度不大清楚。我配好50mg/ml,平板是20ml,那我是加原液20ul构成1mg就可以,还是稀释卡那1:1000再取200ul?

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65楼2016-10-20 15:46:31
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feierorange

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
65楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-20 15:46:31
抗生素是卡那,加的浓度不大清楚。我配好50mg/ml,平板是20ml,那我是加原液20ul构成1mg就可以,还是稀释卡那1:1000再取200ul?
...

浓度应该没有问题 我们的使用浓度也是50ug/ml
66楼2016-10-20 16:37:10
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Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想问一下,你的那个加卡那是热休克后培养的时候用的是含卡那的LB吗。如果是的话,菌是不会长的。热休克后,应加入不含抗性的培养基进行培养,这样是让细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因。还有要说明的是,感受态细菌本生是没有质粒的
67楼2016-10-20 17:23:08
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
67楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 17:23:08
我想问一下,你的那个加卡那是热休克后培养的时候用的是含卡那的LB吗。如果是的话,菌是不会长的。热休克后,应加入不含抗性的培养基进行培养,这样是让细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因。还有 ...

没加卡那

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68楼2016-10-20 19:29:09
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

【答案】应助回帖

确定质粒没有问题的话,未酶切的质粒 感受态正常的话  热转一般 效率会非常高 。

首先确定质粒没有问题,其次更换感受态。

自己懒得做的话  购买公司的就是
麻辣王子不爱做实验
69楼2016-10-20 20:48:07
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

70楼2016-10-20 20:51:10
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