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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌 已有11人参与

昨天我做了4个转化。
1.未加卡那的感受态—长了大量密密麻麻的菌
2.加卡那的感受态—不长
3.加卡那未酶切质粒的感受态—不长
4.加卡那重组克隆感受态—不长
1说明感受态是活的,2说明卡那没失效,3说明质粒没导进去或质粒错误或感受态感受状态不好?
求大神有时间帮我看下

@wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想问一下,你的那个加卡那是热休克后培养的时候用的是含卡那的LB吗。如果是的话,菌是不会长的。热休克后,应加入不含抗性的培养基进行培养,这样是让细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因。还有要说明的是,感受态细菌本生是没有质粒的
67楼2016-10-20 17:23:08
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

质粒已去磷酸化回收,基因也酶切回收了

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-16 11:50:34
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

我只求帮我分析一下,问题出在哪,大致方向

发自小木虫Android客户端
3楼2016-10-16 12:00:04
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-16 22:21:49
3说明质粒转化失败或者质粒状态不好
4说明构建失败,可能酶切、连接、转化出现问题

建议逐一排除可能的问题
4楼2016-10-16 13:24:12
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