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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化不长菌
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
40楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-17 22:42:45
加质粒转化一直没长吗？
...

没长，可能是因为我加的量太多了，加了9ul，老师叫我改成1ul试试

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41楼2016-10-17 23:03:51
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策马入林

新虫 (小有名气)
楼主，别挣扎了，重新做感受态，是感受态的问题，你可以用一个商品化的感受态试试就知道了
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42楼2016-10-17 23:08:57
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小冀-

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【答案】应助回帖

引用回帖:
41楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 23:03:51
没长，可能是因为我加的量太多了，加了9ul，老师叫我改成1ul试试
...

加的质粒浓度要小于50ng/ul,体积小于10ul

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···
43楼2016-10-17 23:11:49
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七文yaya

新虫 (初入文坛)
卡那浓度呢？另外你刚转化完摇1小时用的应该是不加抗生素的LB，要使抗性基因复苏。其他步骤都确认没问题的话，就可能质粒不太好了，质粒够多的话酒精纯化一下再试一下未酶切组。暂时先不用做4了吧。

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44楼2016-10-18 00:17:16
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ken19860823

木虫 (正式写手)
引用回帖:
39楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 22:33:02
是切胶回收的，当时跑5ul体系还是有亮度的
...

检查下连接酶过期没，然后有的实验室喜欢连接大片的时候先65度10min后再加连接酶，别先把酶加进去。我之前折腾过这个，有的时候就是太简单反而做失败不好找原因。有个好办法是把原始做成功的protocol重头到尾仔细读，会有收获。实在不行，换个人试试。

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做基因修饰的老菜鸡
45楼2016-10-18 06:16:35
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
42楼: Originally posted by 策马入林 at 2016-10-17 23:08:57
楼主，别挣扎了，重新做感受态，是感受态的问题，你可以用一个商品化的感受态试试就知道了

我试试

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46楼2016-10-18 06:54:01
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
43楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-17 23:11:49
加的质粒浓度要小于50ng/ul,体积小于10ul
...

浓度一样，但我加了20ul，老师说平板体积大要多加点

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47楼2016-10-18 06:54:48
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小冀-

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引用回帖:
47楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-18 06:54:48
浓度一样，但我加了20ul，老师说平板体积大要多加点
...

涂布的时候加了20？还是？

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···
48楼2016-10-18 07:59:21
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
48楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-18 07:59:21
涂布的时候加了20？还是？
...

是的，20

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49楼2016-10-18 09:50:23
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小冀-

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我们都是涂100-200

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···
50楼2016-10-18 09:53:21
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