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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
40楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-17 22:42:45
加质粒转化一直没长吗?
...

没长,可能是因为我加的量太多了,加了9ul,老师叫我改成1ul试试

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41楼2016-10-17 23:03:51
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策马入林

新虫 (小有名气)

楼主,别挣扎了,重新做感受态,是感受态的问题,你可以用一个商品化的感受态试试就知道了
42楼2016-10-17 23:08:57
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
41楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 23:03:51
没长,可能是因为我加的量太多了,加了9ul,老师叫我改成1ul试试
...

加的质粒浓度要小于50ng/ul,体积小于10ul

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···
43楼2016-10-17 23:11:49
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七文yaya

新虫 (初入文坛)

卡那浓度呢?另外你刚转化完摇1小时用的应该是不加抗生素的LB,要使抗性基因复苏。其他步骤都确认没问题的话,就可能质粒不太好了,质粒够多的话酒精纯化一下再试一下未酶切组。暂时先不用做4了吧。

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44楼2016-10-18 00:17:16
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ken19860823

木虫 (正式写手)

引用回帖:
39楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 22:33:02
是切胶回收的,当时跑5ul体系还是有亮度的
...

检查下连接酶过期没,然后有的实验室喜欢连接大片的时候先65度10min后再加连接酶,别先把酶加进去。我之前折腾过这个,有的时候就是太简单反而做失败不好找原因。有个好办法是把原始做成功的protocol重头到尾仔细读,会有收获。实在不行,换个人试试。

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做基因修饰的老菜鸡
45楼2016-10-18 06:16:35
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
42楼: Originally posted by 策马入林 at 2016-10-17 23:08:57
楼主,别挣扎了,重新做感受态,是感受态的问题,你可以用一个商品化的感受态试试就知道了

我试试

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46楼2016-10-18 06:54:01
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
43楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-17 23:11:49
加的质粒浓度要小于50ng/ul,体积小于10ul
...

浓度一样,但我加了20ul,老师说平板体积大要多加点

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47楼2016-10-18 06:54:48
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小冀-

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引用回帖:
47楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-18 06:54:48
浓度一样,但我加了20ul,老师说平板体积大要多加点
...

涂布的时候加了20?还是?

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···
48楼2016-10-18 07:59:21
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
48楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-18 07:59:21
涂布的时候加了20?还是?
...

是的,20

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49楼2016-10-18 09:50:23
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

···
50楼2016-10-18 09:53:21
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