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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化不长菌
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌 已有11人参与

昨天我做了4个转化。
1.未加卡那的感受态—长了大量密密麻麻的菌
2.加卡那的感受态—不长
3.加卡那未酶切质粒的感受态—不长
4.加卡那重组克隆感受态—不长
1说明感受态是活的，2说明卡那没失效，3说明质粒没导进去或质粒错误或感受态感受状态不好？
求大神有时间帮我看下

@wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-10-16 11:50:07
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ken19860823

木虫 (正式写手)
引用回帖:
39楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 22:33:02
是切胶回收的，当时跑5ul体系还是有亮度的
...

检查下连接酶过期没，然后有的实验室喜欢连接大片的时候先65度10min后再加连接酶，别先把酶加进去。我之前折腾过这个，有的时候就是太简单反而做失败不好找原因。有个好办法是把原始做成功的protocol重头到尾仔细读，会有收获。实在不行，换个人试试。

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做基因修饰的老菜鸡
45楼2016-10-18 06:16:35
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
质粒已去磷酸化回收，基因也酶切回收了

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2楼2016-10-16 11:50:34
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
我只求帮我分析一下，问题出在哪，大致方向

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3楼2016-10-16 12:00:04
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-16 22:21:49
3说明质粒转化失败或者质粒状态不好
4说明构建失败，可能酶切、连接、转化出现问题

建议逐一排除可能的问题
赞一下 回复此楼
4楼2016-10-16 13:24:12
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